近年來(lái)已經(jīng)開(kāi)發(fā)了許多熒光蛋白(FPs)，使用哪種熒光蛋白（FP）跟多種因素有關(guān)。

單色實(shí)驗(yàn)

對(duì)于單色實(shí)驗(yàn)，綠色熒光蛋白是最常用的。EGFP是最受歡迎的綠色熒光蛋白，是許多單色研究的理想選擇。然而，其他綠色熒光蛋白，如TurboGFP（又名maxGFP），對(duì)于某些應(yīng)用可能是一種更好的選擇。TurboGFP比EGFP具有更優(yōu)越的功能，如更明亮的綠色熒光，成熟速度更快，對(duì)高pH值和光穩(wěn)定性耐受更強(qiáng)，這些使其成為早期信號(hào)檢測(cè)和高靈敏度實(shí)驗(yàn)的理想選擇。如果是紅色熒光蛋白，mCherry則由于其單體結(jié)構(gòu)，良好的熒光性質(zhì)和低毒性等特點(diǎn)使其成為大多數(shù)實(shí)驗(yàn)的選擇，它特別適用于蛋白標(biāo)記或者當(dāng)細(xì)胞中其他紅色熒光蛋白發(fā)生細(xì)胞毒性或蛋白聚集時(shí)。在熒光蛋白發(fā)生二聚化和聚集的情況下，dTomato依然可以發(fā)出很亮的熒光。DsRed_Express2是另一個(gè)紅色熒光蛋白的理想選擇，它是具有最小細(xì)胞毒性的紅色熒光蛋白。

多色實(shí)驗(yàn)

對(duì)于同時(shí)使用多個(gè)熒光基團(tuán)的實(shí)驗(yàn)（包括熒光蛋白和其他染料如DAPI），研究人員必須仔細(xì)考慮熒光基團(tuán)的光譜性質(zhì)，以確保激發(fā)光和發(fā)射光可以在顯微鏡、流式細(xì)胞儀或其他熒光檢測(cè)設(shè)備的濾光片上可以進(jìn)行觀察區(qū)分。通常情況下，熒光檢測(cè)設(shè)備應(yīng)該能夠讀出每種熒光的熒光信號(hào)，而相互不干擾。通過(guò)使用激發(fā)濾光片來(lái)激發(fā)目的熒光基團(tuán)產(chǎn)生合適頻率的激發(fā)光，使用發(fā)射濾片控制目的熒光基團(tuán)的發(fā)射熒光進(jìn)入熒光檢測(cè)器。對(duì)于兩種顏色，標(biāo)準(zhǔn)綠色熒光蛋白如EGFP加上標(biāo)準(zhǔn)紅色熒光蛋白如mCherry幾乎在所有熒光顯微鏡和流式細(xì)胞儀上都能正常工作。對(duì)于三種顏色，藍(lán)色、綠色和紅色熒光蛋白組合（如TagBFP + EGFP + mCherry）或青色、黃色和紅色組合（例如CyPet + YPet + mCherry）可以很好的一起配合工作，因?yàn)檫@些組合在大多數(shù)熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀上易于分辨觀察。

熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）

熒光蛋白廣泛應(yīng)用于基于熒光共振能量轉(zhuǎn)移（FRET）的實(shí)驗(yàn)中。FRET是一種物理過(guò)程，在此期間，受激發(fā)供體發(fā)色基團(tuán)分子通過(guò)非放射性偶極間耦合將能量轉(zhuǎn)移到受體發(fā)色基團(tuán)。FRET會(huì)導(dǎo)致供體熒光強(qiáng)度衰減，而受體發(fā)射熒光增加。FRET需要一些前提條件：供體和受體必須很接近（10-100Å）；受體的吸收光譜必須與供體的發(fā)射光譜重疊；供體和受體的躍遷偶極方向必須是平行的。FRET是距離依賴型的，且FRET的效率與供體和受體之間距離的六次方成反比。因此，它對(duì)于距離的微小變化非常敏感，使其成為許多研究應(yīng)用的強(qiáng)大的工具，如研究DNA或蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，研究分子間相互作用等。青—黃色供體/受體對(duì)CyPet-YPet常用于FRET實(shí)驗(yàn)。

我們的建議：

單熒光：EGFP，TurboGFP，mCherry，dTomato或DsRed_Express2（這些熒光蛋白可以跟DAPI一起使用）

雙熒光：EGFP + mCherry或TurboGFP + mCherry （這些組合可以跟DAPI一起使用）

三熒光：TagBFP + EGFP + mCherry或CyPet + YPet + mCherry （如果使用合適的濾片，第二種組合可以跟DAPI一起使用）

FRET-based應(yīng)用：CyPet - YPet

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