水皰性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）載體在研究病毒顆粒入侵宿主細(xì)胞、辨認(rèn)介導(dǎo)病毒感染細(xì)胞的細(xì)胞表面受體、篩選抑制病毒藥物以及疫苗開發(fā)方面有著廣泛的應(yīng)用。VSV病毒載體可以高效地利用非同源的病毒蛋白進(jìn)行假型化（presudotyped），例如要求使用高生物安全等級的病毒包膜蛋白，因此VSV也是研究高風(fēng)險(xiǎn)病毒細(xì)胞侵入機(jī)制的理想選擇。 云舟生物開發(fā)了一系列先進(jìn)的技術(shù)和試劑，大為改進(jìn)了重組VSV包裝的滴度、純度、可靠性和穩(wěn)定性，特別是結(jié)合了我們的VSV載體克隆系統(tǒng)。
訂購信息
| 生產(chǎn)規(guī)格 | 應(yīng)用 | 滴度 | 體積 | 價格 | 周期 |
|---|
| VSV-G蛋白VSV病毒 |
| VSV中量制備 | 細(xì)胞培養(yǎng) | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ￥7,780 | 21-35天 |
| VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ￥9,780 |
| 超純化VSV中量制備 | 細(xì)胞培養(yǎng)和體內(nèi)應(yīng)用 | >108 PFU/ml | 500 ul (5x100 ul) | ￥11,880 |
| 超純化VSV大量制備 | 1 ml (10x100 ul) | ￥18,880 |
| SARS-CoV-2 S蛋白及其變體的假VSV病毒（轉(zhuǎn)基因?yàn)長uc或EGFP） |
| VSV中量制備 | 細(xì)胞培養(yǎng) | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ￥15,380 | 21-35天 |
| VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ￥19,580 |
| SARS-CoV-2 S蛋白及其變體的假VSV病毒（其它類型轉(zhuǎn)基因） |
| VSV中量制備 | 細(xì)胞培養(yǎng) | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ￥15,380 | 21-35天 |
| VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ￥19,580 |
服務(wù)詳情
云舟生物開發(fā)了兩種載體骨架用于克隆VSV基因組。兩個骨架均包含有活性的VSV基因組成分，但是不含有G糖蛋白。第一個載體包含VSV-M和VSV-L基因，可以被用于克隆您的目的基因（圖1a）。第二個載體在VSV-N基因上游增加了一個報(bào)告基因（圖1b）。如果您還需要其它版本的載體，請聯(lián)系我們。
圖1 VSV載體骨架，包含VSV N-P-M-L基因
病毒類型
- VSV-G膜蛋白覆蓋的VSV病毒
- 使用冠狀病毒S蛋白或者其突變型S蛋白假型化的VSV病毒
- 使用其他膜蛋白進(jìn)行假型化的VSV病毒
- 無膜蛋白的表面光禿的VSV病毒（可用于陰性對照）
交付內(nèi)容
| 非純化VSV制備服務(wù) | 純化VSV制備服務(wù) |
| 交付內(nèi)容 | 定制病毒，按照規(guī)格交付： - 中量制備：>107PFU/ml，10x100 ul
- ?量制備：>108PFU/ml，10x100 ul
| 定制病毒，按照規(guī)格交付： - 中量制備：>108PFU/ml，5x100 ul
- ?量制備：>108PFU/ml，10x100 ul
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對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應(yīng)贈送： - 中量制備：>107PFU/ml，2x100 ul
- ?量制備：>108PFU/ml，2x100 ul
| 對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應(yīng)選購： - 中量制備：>108PFU/ml，5x100 ul, ￥3,800
- ?量制備：>108PFU/ml，10x100 ul, ￥6,100
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| 病毒重懸液 | HBSS緩沖液 | HBSS緩沖液 |
| 運(yùn)輸/存儲 | 干冰/-80°C，避免反復(fù)凍融 | 干冰/-80°C，避免反復(fù)凍融 |
| 推薦應(yīng)用 | 體外培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo) | 體外培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)、動物體內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo) |
對照病毒
為了更好地開展您的實(shí)驗(yàn)，我們按照“對照病毒與定制病毒的生物學(xué)應(yīng)用相匹配”的原則給您贈送或者推薦對照病毒。例如，如果定制病毒表達(dá)一個基因，則推薦的對照病毒表達(dá)熒光蛋白EGFP。如果定制病毒表達(dá)打靶某個基因的shRNA，則對照病毒表達(dá)一個Scramble shRNA。推薦的對照病毒信息如下表所示：
運(yùn)輸/儲存
我們的VSV病毒存儲在HBSS緩沖液中，并采用干冰運(yùn)輸。收到VSV病毒后，請立即放置于-80℃，長期貯存至少6個月。VSV病毒的保質(zhì)期約為一年。請避免反復(fù)凍融，因?yàn)檫@會導(dǎo)致慢病毒滴度大幅下降。
生產(chǎn)/質(zhì)控
圖2展示了VSV的包裝流程。VSV包裝使用VSV-ΔG轉(zhuǎn)移質(zhì)粒，該質(zhì)粒不表達(dá)G糖蛋白，但是攜帶有目的基因，包裝時連同五個輔助質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞。五個輔助質(zhì)粒分別表達(dá)VSV N、P、G、L蛋白，以及T7 RNA聚合酶。包裝質(zhì)粒表達(dá)的病毒蛋白對于含有目的基因的病毒顆粒組裝是必須的。對比傳統(tǒng)利用輔助病毒的包裝方法，該流程可有效減少病毒包裝周期，增加病毒純度（無輔助病毒）。制備覆蓋有G糖蛋白的VSV后，收集細(xì)胞上清，再次感染包裝細(xì)胞。此時若同時轉(zhuǎn)染一個表達(dá)異源包膜蛋白的質(zhì)粒，則可以獲得假型化的VSV病毒。對于超純化的VSV病毒（體內(nèi)應(yīng)用級別），使用蔗糖密度梯度離心法濃縮純化。我們使用噬斑法檢測滴度。
圖2 典型的VSV病毒包裝流程
對于我們生產(chǎn)的每一個重組VSV病毒，質(zhì)量控制包括滴度檢測、無菌測試、支原體檢測等。如果VSV病毒載體表達(dá)熒光蛋白，則我們會進(jìn)行熒光轉(zhuǎn)導(dǎo)測試。如果VSV病毒載體含有藥篩標(biāo)記，我們也會在轉(zhuǎn)導(dǎo)測試后伴隨進(jìn)行藥篩測試。此外，對于超純化VSV，我們會進(jìn)行內(nèi)毒素檢測。
試驗(yàn)驗(yàn)證
我們開發(fā)了一系列技術(shù)用以優(yōu)化我們的VSV包裝流程。經(jīng)優(yōu)化后我們的病毒展現(xiàn)出對比已公開的方案具備更高的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率（圖3）。
圖3 VSV-G糖蛋白覆蓋的VSV轉(zhuǎn)導(dǎo)BHK-21細(xì)胞。轉(zhuǎn)導(dǎo)前與轉(zhuǎn)導(dǎo)后24小時分別拍攝。倍數(shù)：100x。左：白光。右：GFP。
此外，我們針對新冠S蛋白（及其D614G突變體）VSV假病毒進(jìn)行大量的試驗(yàn)驗(yàn)證。結(jié)果表明新冠S蛋白（及其D614G突變體）VSV假病毒可以有效轉(zhuǎn)導(dǎo)高表達(dá)hACE2的BHK-21細(xì)胞，但較難轉(zhuǎn)導(dǎo)低水平表達(dá)hACE2的BHK-21細(xì)胞（圖4）。因此我們推薦使用我們的ACE2表達(dá)細(xì)胞株進(jìn)行新冠S蛋白假病毒或VSV-G假病毒的轉(zhuǎn)導(dǎo)實(shí)驗(yàn)。
圖4 新冠S蛋白假病毒VSV轉(zhuǎn)導(dǎo)BHK-21和BHK-21-ACE2細(xì)胞
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使用說明書
VSV體外應(yīng)用說明書
COA
常見問題解答
我們使用噬斑試驗(yàn)測定VSV病毒滴度。簡單來說，即是對單層的易感細(xì)胞進(jìn)行病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)，并在培養(yǎng)皿中覆蓋一層瓊脂以限制病毒的擴(kuò)散。每個被感染的細(xì)胞都將裂解并進(jìn)一步造成其周邊接觸的細(xì)胞被感染，最終在培養(yǎng)皿上形成一個噬斑。每個噬斑來源于一個VSV病毒顆粒，因此可以通過計(jì)算噬斑的數(shù)量來換算出VSV滴度。
載體家生產(chǎn)的重組VSV病毒是復(fù)制缺陷型的，刪除了包膜上的G糖蛋白表達(dá)基因。我們制備的VSV假病毒使用異源病毒的包膜蛋白，包括一些來源于需要被高度隔離的病毒類型。重組VSV不能進(jìn)行額外的復(fù)制，在BSL2等級的實(shí)驗(yàn)室中也能操作。因此我們生產(chǎn)的重組VSV特別適合用于在普通實(shí)驗(yàn)室研究高風(fēng)險(xiǎn)性病毒的由其包膜蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞感染機(jī)制。
交付周期是指訂單接收到發(fā)貨之間的時間，不包括需要客戶提供任何物料（如病毒載體）的等待時間。
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