重組AAV病毒近年來已成為用于基因治療和疫苗開發(fā)的熱門基因遞送載體。在早期臨床研究中，為測(cè)試AAV載體在體內(nèi)的可靠性和安全性，一個(gè)關(guān)鍵的問題便是需要鑒定其在多種器官和組織中的分布情況與留存時(shí)長。

目前雖有一些研究報(bào)道了常用血清型的 AAV的組織分布模式，但是這些研究提供的數(shù)據(jù)量上還未能達(dá)到臨床應(yīng)用的要求。現(xiàn)今的AAV組織分布鑒定方法通常僅具有器官水平的分辨率，而沒有深入到亞器官水平上的不同細(xì)胞類型。而且這些研究通常只專注于使用靜脈注射的方式輸送AAV，同時(shí)缺乏其它給藥途徑的嘗試。此外更顯著的問題是，當(dāng)前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)都是在嚙齒類動(dòng)物身上進(jìn)行的，而這些動(dòng)物由于與人類在進(jìn)化和生理上高度差異，從這些動(dòng)物獲得的數(shù)據(jù)結(jié)果令人懷疑是否同樣適用于人類。當(dāng)前許多新開發(fā)血清型，包括天然的和人工合成的，完全缺乏詳細(xì)的組織分布數(shù)據(jù)。令這些問題更復(fù)雜的是，鑒于不同的轉(zhuǎn)基因在體內(nèi)會(huì)引發(fā)有差異性的細(xì)胞反應(yīng)，如先天免疫反應(yīng)，即使是包裝成相同血清型的不同轉(zhuǎn)基因載體也會(huì)具有不同的組織分布模式。

載體家提供的AAV組織分布鑒定服務(wù)將有助于克服以上的問題，為您獲得特定物種的高分辨率的AAV組織分布圖像。值得一提的是，我們還可以在非人靈長類（Non-human primate，NHP）中進(jìn)行該實(shí)驗(yàn)。從小鼠模型到猴模型，我們提供的是當(dāng)前產(chǎn)業(yè)界物種跨度最完整的AAV組織分布鑒定服務(wù)。

如何獲取AAV組織分布鑒定服務(wù)？

點(diǎn)擊主頁上的“發(fā)送需求咨詢”按鈕在線提交您的需求，我們的技術(shù)人員會(huì)向您發(fā)送包含價(jià)格、周期和其他相關(guān)信息在內(nèi)的服務(wù)方案。

服務(wù)亮點(diǎn)

• 全方面的服務(wù)平臺(tái)：載體家是當(dāng)前全球唯一一家具備AAV臨床前、臨床CRO和CDMO一站式服務(wù)的企業(yè)。我們的AAV相關(guān)服務(wù)涵蓋載體設(shè)計(jì)、載體優(yōu)化、載體克隆、文庫構(gòu)建、病毒包裝、衣殼定向進(jìn)化和工程改造、AAV組織分布鑒定、GMP病毒生產(chǎn)等。
• 使用包括非人靈長類在內(nèi)的多種模式生物：我們提供一系列模式生物用于進(jìn)行AAV組織分布鑒定，如小鼠、大鼠、以及重要的兩種非人靈長類：食蟹猴（Macaca fascicularis）和獼猴（Macaca Mulatta）。所有體內(nèi)試驗(yàn)均在經(jīng)過AAALAC認(rèn)證的機(jī)構(gòu)中以專業(yè)認(rèn)可的方式進(jìn)行。
• 多種分析方法：我們提供多種方式鑒定AAV在器官、組織和細(xì)胞水平上的分布鑒定，包括報(bào)告基因熒光成像、流式細(xì)胞儀分離熒光陽性細(xì)胞、熒光素酶報(bào)告基因活性測(cè)定、qPCR測(cè)定基因組拷貝數(shù)、RT-PCR分析目的基因表達(dá)等。
• 使用barcode和NGS技術(shù)復(fù)合分析：許多AAV的臨床前管線需要對(duì)比多種載體的組織分布，然后選擇最合適的用于后續(xù)研究。這之中的情況可能有同樣的基因載體用不同的血清型衣殼包裹，也可能是同樣的一個(gè)血清型衣殼包裹了不同的基因載體。載體家開發(fā)的專有平臺(tái)可以在同個(gè)物種中鑒定不同AAV基因載體的組織分布。具體而言，每個(gè)基因載體均帶有一個(gè)barcode。在給定組織中，通過NGS測(cè)定這些barcode就能鑒定這些AAV載體的基因組DNA或mRNA在組織中的分布模式。該方法可以顯著地減少鑒定的成本和時(shí)長，更關(guān)鍵的是，該方法允許在組織中轉(zhuǎn)導(dǎo)高豐度的互為內(nèi)參的不同類型載體，從而增加了數(shù)據(jù)的靈敏度和可靠性。
• 可提供多種AAV血清型：我們提供一系列常用的血清型衣殼用于包裝您的AAV載體（血清型1-9、rh10、DJ、DJ/8、PHP.eB、PHP.S、AAV2-retro、AAV2-QuadYF和AAV2.7m8）。我們還能根據(jù)您的需求快速開發(fā)新的血清型。
• 多途徑給藥：我們可使用多種方式注射AAV，如尾靜脈注射、面靜脈注射、腦室內(nèi)注射、鞘內(nèi)注射、視網(wǎng)膜下注射、玻璃體內(nèi)注射、鼓室內(nèi)注射和肌肉注射等。
• 完善的技術(shù)支持：我們的科學(xué)家在AAV項(xiàng)目上具有深厚的經(jīng)驗(yàn)，能夠?yàn)槟峁┤娴募夹g(shù)支持，包括載體設(shè)計(jì)、病毒包裝、GMP生產(chǎn)、細(xì)胞培養(yǎng)分析以及動(dòng)物手術(shù)等。

試驗(yàn)數(shù)據(jù)

以下數(shù)據(jù)為我們測(cè)試的不同血清型AAV在多種組織中的分布情況：

圖1 小鼠多種方式注射AAV9-CAG-EGFP，對(duì)多種器官組織取材、制備冷凍切片，激光共聚焦顯微鏡觀察：（A）內(nèi)耳，左耳鼓室內(nèi)注射后第13天；（B）海馬和脊髓前角，面靜脈注射后第10天；（C）視網(wǎng)膜、肝、胰腺和骨骼肌，尾靜脈注射后第12天。

圖2 小鼠尾靜脈注射AAV1-CMV-EGFP。注射后第12天，處死取材，制備冷凍切片。激光共聚焦顯微鏡觀察。

圖3 小鼠視網(wǎng)膜下注射AAV8。注射后第20天，處死取材，制備冷凍切片。激光共聚焦顯微鏡觀察。（A）AAV8-ProA1-mCherry（B）AAV8-hRHO-EGFP。

圖4 向出生48小時(shí)的新生鼠（2只雄性、1只雌性）靜脈注射AAV9（~1.5x10¹⁰ GC）。注射第六周后，qPCR檢測(cè)小鼠各個(gè)器官中的AAV拷貝數(shù)。