云舟生物的點突變細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株可針對細胞基因組靶序列創(chuàng)造點突變。我們的點突變細胞采用CRISPR相關(guān)技術(shù)制備，需要針對轉(zhuǎn)導細胞的靶序列導入一個特異性的gRNA/Cas9 RNP復合物，以及一個可通過HDR修復方式引入突變序列模板的供體載體。我們擁有一系列獨特的技術(shù)，可讓我們在很短的周期內(nèi)實現(xiàn)具有高HDR率的高效基因遞送，高成功率獲得敲入純合子。
亮點：
圖1 點突變細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建流程。
| 服務 | 交付內(nèi)容 | 價格(CNY) | 周期 |
|---|---|---|---|
| 點突變細胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建 | 一個純合子單克隆細胞株（>106個細胞/管, 2管） | ￥40,980起 | 12-18周 |
* 增加交付單克隆數(shù)將收取額外費用。
| 試驗項目 | 方法 |
| 點突變驗證（默認） | PCR、Sanger測序 |
| 表達測試（額外收費） | RT-qPCR、WB、IF、FACS |
| 脫靶效應分析（額外收費） | NGS、PCR、Sanger測序 |
| 染色體分析（額外收費） | 核型分析 |
| 無菌測試（默認） | PCR檢測支原體、生物負荷檢測等 |
圖2 使用我們的點突變方法在不同類型細胞中測試突變率。
圖3 在THP-1細胞中驗證點突變效果。（A）Sanger測序檢測GOI序列中的點突變。紅色方框的位置是非同義突變，綠色方框的位置是同義突變。（B）對突變細胞（PM）和野生型細胞（WT）的靶位點PCR，PCR產(chǎn)物顯示其長度相同，表明點突變沒有引發(fā)序列結(jié)構(gòu)性變異。
盡管同義突變的氨基酸序列不變，但是會影響密碼子偏好性、mRNA結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性以及翻譯效率。在細胞株中引入同義突變有助于研究這些轉(zhuǎn)錄后階段可能產(chǎn)生的變化。此外，引入同義突變還可以擾亂CRISPR組分的靶序列（即PAM序列以及其鄰近序列），抑制脫靶效應造成和舊CRISPR-Cas9編輯位點造成的非目標切割。
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