IVT saRNA制備

自擴(kuò)增RNA（saRNA）具有RNA分子自我擴(kuò)增的能力，其表達(dá)量比傳統(tǒng)mRNA更高，表達(dá)時(shí)間也更長(zhǎng)。這種能力是通過在RNA結(jié)構(gòu)中整合病毒序列（編碼復(fù)制酶和復(fù)制子元件）來(lái)實(shí)現(xiàn)的，并促使RNA以RNA依賴的方式自我復(fù)制。由于saRNA產(chǎn)生顯著免疫反應(yīng)所需的劑量遠(yuǎn)低于mRNA，該項(xiàng)技術(shù)正迅速被應(yīng)用于下一代RNA疫苗的研發(fā)，此外，saRNA還是蛋白替代療法中的一種非常有潛力的藥物候選。saRNA的序列優(yōu)化和生產(chǎn)過程與mRNA類似。云舟生物專門從事各種應(yīng)用的高質(zhì)量saRNA的設(shè)計(jì)和生產(chǎn)。

亮點(diǎn)

fast-TAT-from-cloning-to-LNP-encapsulation

從載體克隆到LNP封裝快至5周

獨(dú)有的序列優(yōu)化技術(shù)，提升表達(dá)水平

高度專業(yè)的團(tuán)隊(duì)為你的saRNA進(jìn)行設(shè)計(jì)與優(yōu)化，以取得最佳的表達(dá)量、產(chǎn)量和質(zhì)量

服務(wù)詳情

預(yù)制saRNA產(chǎn)品
治療性IVT RNA開發(fā)：IVT載體設(shè)計(jì)和克隆、IVT RNA生產(chǎn)和純化
LNP封裝：標(biāo)準(zhǔn)配方、定制配方、抗體偶聯(lián)LNP
CDMO服務(wù)：工藝開發(fā)、GMP生產(chǎn)、灌裝

技術(shù)詳情

saRNA復(fù)制機(jī)制

saRNA的自擴(kuò)增能力依賴于其第一個(gè)開放閱讀框編碼的復(fù)制酶。如圖1所示，從saRNA中翻譯出的非結(jié)構(gòu)蛋白（nsP）基因，其序列來(lái)源于甲病毒（Alphavirus），可形成多蛋白復(fù)制復(fù)合物（復(fù)制酶）負(fù)責(zé)RNA復(fù)制。其中，nsP1具有甲基轉(zhuǎn)移酶和鳥嘌呤轉(zhuǎn)移酶活性，扮演加帽酶的角色，而nsP2則是一種RNA解旋酶，并具有三磷酸酶活性。nsP3介導(dǎo)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。nsP4是一種RNA依賴的RNA聚合酶。復(fù)制酶復(fù)合物合成作為下游RNA復(fù)制模板的全長(zhǎng)負(fù)鏈RNA。此外，保守序列元件（CSE）被放入轉(zhuǎn)基因的5' 和3' 非翻譯區(qū)（UTR），以實(shí)現(xiàn)復(fù)制酶介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因擴(kuò)增和轉(zhuǎn)錄。

由于復(fù)制酶基因的加入增大了的分子長(zhǎng)度，saRNA在體外通常比傳統(tǒng)mRNA更難生產(chǎn)。特別是對(duì)于一條高效的saRNA生產(chǎn)線，確保產(chǎn)物的高一致性和高質(zhì)量是極具挑戰(zhàn)性的。云舟生物對(duì)saRNA生產(chǎn)線投入了大量研發(fā)資源，該生產(chǎn)線還可以根據(jù)您的項(xiàng)目需求進(jìn)行調(diào)整和定制。

圖1 saRNA的復(fù)制機(jī)制。

試驗(yàn)驗(yàn)證

IVTsaRNA expression in HEK293T cells.jpg

圖2 表達(dá)EGFP的saRNA與mRNA轉(zhuǎn)染HEK293T的效果對(duì)比。

IVT saRNA expression in mice.jpg

圖3 體內(nèi)試驗(yàn)表明，saRNA相對(duì)mRNA表現(xiàn)出更長(zhǎng)的表達(dá)時(shí)長(zhǎng)。30 ug LNP封裝的FLuc mRNA與10 ug LNP封裝的FLuc saRNA對(duì)比表達(dá)效果，傳統(tǒng)mRNA在48 h后無(wú)法檢測(cè)到表達(dá)，而saRNA在肌肉注射后的表達(dá)可維持至少8天。

不同類型IVT RNA的比較

	mRNA	circRNA	saRNA
結(jié)構(gòu)	線性分子，通常包含5’ 帽子、5’ UTR、GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴	環(huán)狀分子，通常包含IRES元件和GOI的ORF	線性分子，通常包含5’ 帽子、5’ UTR、復(fù)制酶和GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴
帽子	需要5’ 帽子維持RNA穩(wěn)定性并招募核糖體	沒有帽子結(jié)構(gòu)，采用IRES元件招募核糖體	需要5’ 帽子維持RNA穩(wěn)定性并招募核糖體
RNA長(zhǎng)度（nt）	100 ~ 10,000	1,000 ～ 5,000	7,000 ~ 10,000
穩(wěn)定性	相對(duì)低	高	相對(duì)低
是否可以在生產(chǎn)時(shí)引入修飾核苷？	是	通常不添加修飾	是
表達(dá)水平	相對(duì)低	中	高
表達(dá)時(shí)長(zhǎng)	相對(duì)短	中	長(zhǎng)
免疫原性	相對(duì)低	中	高