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載體設(shè)計與克隆
重組病毒包裝
特色服務(wù)
CRO服務(wù)
CDMO服務(wù)
產(chǎn)品
COVID-19
冠狀病毒解決方案
進一步了解 >> 我們的質(zhì)量體系通過ISO 9001認證。這些產(chǎn)品是在我們先進的設(shè)施中嚴格控制下生成的。

細菌（E. coli）重組蛋白表達

由于E. coli具有生產(chǎn)時間短、技術(shù)簡單、易于放大生產(chǎn)和低成本等優(yōu)點，因此是重組蛋白表達最常用的宿主。云舟生物對大腸桿菌中多種類型重組蛋白的表達進行了一系列實驗流程上的優(yōu)化，包括胞外和胞內(nèi)蛋白、可溶和不可溶蛋白等。

亮點

  • 低成本、高產(chǎn)量、易于放大生產(chǎn)
  • 無論是可溶性蛋白還是包涵體均可進行優(yōu)化
  • 可選用多種載體骨架以實現(xiàn)最佳的表達效率
服務(wù)詳情

 Bacterial Protein expression service workflow

服務(wù)詳情
服務(wù)簡介交付內(nèi)容價格（CNY）周期
載體設(shè)計與克隆為目的基因選擇合適的融合標簽、純化標簽，進行密碼子優(yōu)化。構(gòu)建含有目的基因的表達載體（如pET）。E. coli甘油菌￥880起5-10天
蛋白小試評估轉(zhuǎn)化合適的大腸桿菌菌株，如BL21 (DE3)。多種條件測試蛋白表達情況、蛋白穩(wěn)定性、以及可溶性，并進行QC*。評估報告￥1,9007-14天
蛋白小量表達和純化根據(jù)評估報告結(jié)果小規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白并純化**。
  • 0.5-1 mg純化蛋白（正常情況）
  • COA
￥3,900起14-21天
蛋白大規(guī)模表達與純化大規(guī)模生產(chǎn)并純化重組蛋白。
  • 可達100+ mg純化蛋白
  • COA
請咨詢

* 對于包涵體，將經(jīng)過溶解步驟，然后進行重折疊和純化。我們將基于蛋白質(zhì)的序列和結(jié)構(gòu)特性來確定合適的重折疊策略。價格也將相應(yīng)調(diào)整。
** 根據(jù)構(gòu)建的載體設(shè)計和蛋白質(zhì)特性確定純化方法。

運輸與存儲

我們的載體默認以E. coli甘油菌形式交付。根據(jù)需求，我們也可以交付質(zhì)粒DNA，并收取一定的額外費用。我們大部分重組蛋白以凍結(jié)的液體形式交付，并以干冰形式運輸。接收到重組蛋白后，請將其存儲于-20°C到-80°C的無菌容器。存儲妥當?shù)闹亟M蛋白通?？煞€(wěn)定保存一年。同時，我們建議對接收到的重組蛋白進行分裝以避免反復(fù)凍融。

質(zhì)量控制

云舟生物克隆的所有載體都保證100%的序列準確性。云舟生物生產(chǎn)的所有重組蛋白均經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制（QC）。對于大多數(shù)系統(tǒng)，默認的質(zhì)量控制包括：（1）酶切分析和Sanger測序驗證蛋白質(zhì)表達載體；（2）通過A260/280測量和SDS-PAGE確定蛋白質(zhì)的濃度和純度。下表列出了常見的額外QC項目服務(wù)。這些服務(wù)可根據(jù)具體需求提供。

額外QC項目方法
內(nèi)毒素檢測LAL
蛋白鑒定Western Blot
Intact MS (reduced)
SEC-HPLC
SEC-MALs
蛋白N端測序
宿主蛋白檢測
標簽去除蛋白酶消化
動力學和親和性分析Octet
Biacore
針對嚙齒類動物的病原體檢測
技術(shù)詳情
載體系統(tǒng)

常見的細菌重組蛋白表達載體系統(tǒng)有pET、pBAD、pCS等。其中，pET載體是一種廣泛使用的載體系統(tǒng)。在pET載體中，目的基因位于噬菌體T7啟動子下游，通過在細胞內(nèi)提供T7 RNA聚合酶來激活轉(zhuǎn)錄表達。這種系統(tǒng)可利用幾乎所有細胞資源用于表達目的基因。下圖為 pET重組蛋白表達載體的關(guān)鍵元件。

關(guān)于更多細菌重組蛋白表達載體的信息，請參照我們的載體指南。

圖1 pET重組蛋白表達載體圖譜

案例研究
Bacterial protein expression QC

圖2 利用大腸桿菌系統(tǒng)生產(chǎn)的重組蛋白。（A）SDS-PAGE結(jié)果展示了重組蛋白的分子量，純度≥95%。（B）通過SEC-HPLC測定純度為≥95%。（C）通過細胞生長試驗測定重組蛋白的生物活性。ED50介于0.5和8 ng/ml之間。

客戶提供載體

如需客戶提供載體，則請按照外來物品接收指南將載體寄送給我們。請嚴格按照我們的指南來進行裝運以免造成物品的任何延誤和損壞?？蛻籼峁┑乃胁牧暇杞?jīng)過QC檢測，每一份材料附加檢測費用。請注意，客戶提供物品接收并通過QC之后生產(chǎn)才正式開始。

載體設(shè)計
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