收取病毒顆粒后，如果病毒載體攜帶熒光報告基因，我們通常首先將病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)一些常見的細胞系（如HEK293細胞），觀察熒光蛋白的表達來檢測病毒的質(zhì)量。然后，根據(jù)不同的病毒類型使用不同的方法來定量測定病毒滴度。有時如果熒光觀察和定量測定的結(jié)果存在較大差異，我們將重新測定或額外進行驗證，以確保我們包裝的病毒是高質(zhì)量的。

慢病毒

我們使用p24 ELISA法測定慢病毒滴度。該方法的三明治免疫試驗可測定HIV-1 核心蛋白p24在慢病毒上清液中的含量水平。我們首先在微量滴定板上加入慢病毒樣本，然后每孔加入HIV-1 p24捕獲抗體進行孵育，并隨后添加生物素化的p24二抗以結(jié)合p24一抗。此后，樣本中加入的辣根過氧化物酶（HRP）標記的鏈霉親和素可特異性結(jié)合生物素化的p24二抗。在最后一步中，加入辣根過氧化物酶底物反應(yīng)液，經(jīng)HRP催化產(chǎn)生有顏色的產(chǎn)物。每個孔的顏色深度最終反映了慢病毒樣本中的p24含量。使用分光光度計測量的樣本吸光度數(shù)值與重組HIV-1的 p24標準曲線進行對照，然后被換算為對應(yīng)的慢病毒滴度。

腺病毒

對于腺病毒，我們同樣會測定功能滴度。將經(jīng)過一系列稀釋的腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)HEK293細胞后，我們使用一種基于免疫細胞化學(xué)的方法，通過檢測腺病毒特異性六鄰體蛋白來計算出被成功轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞，每一個被免疫組化染色的細胞被視為一個轉(zhuǎn)染單元。以非常低的感染復(fù)數(shù)（MOI）感染細胞，以確保大多數(shù)被轉(zhuǎn)導(dǎo)的細胞被單個病毒顆粒感染。該測定方法與常規(guī)空斑測定具有良好的相關(guān)性。對于超純化腺病毒，我們直接測量病毒顆粒的光密度（使用OD₂₆₀）來預(yù)估病毒的滴度，因為超純化腺病毒的光密度與功能性滴度之間存在緊密相關(guān)性。腺病毒具有非常高的穩(wěn)定性，可以在室溫下放置數(shù)天還能保持功能活性。

腺相關(guān)病毒（AAV）

我們通過直接從裂解的病毒顆粒中提取病毒基因組來測定AAV的滴度，使用qPCR來精確定量病毒基因組的拷貝數(shù)（使用ITR區(qū)域的拷貝數(shù)作為參照）。腺相關(guān)病毒顆粒是非常穩(wěn)定的，可以在室溫下放置數(shù)天還能保持功能活性。因此，腺相關(guān)病毒的滴度盡管不是以細胞轉(zhuǎn)導(dǎo)的方式測定，但是也非常接近其實際功能滴度。

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