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進(jìn)一步了解 >> 我們的質(zhì)量體系通過ISO 9001認(rèn)證。這些產(chǎn)品是在我們先進(jìn)的設(shè)施中嚴(yán)格控制下生成的。

載體構(gòu)建

作為全球最大的定制載體服務(wù)商,云舟生物可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)需求量身定制您的DNA載體。我們擁有超過200種經(jīng)過優(yōu)化且適用于各種研究應(yīng)用的載體系統(tǒng),均經(jīng)過體外試驗(yàn)以及體內(nèi)試驗(yàn)(若可行)驗(yàn)證。使用我們的平臺(tái)進(jìn)行載體定制和克隆將顯著降低傳統(tǒng)實(shí)驗(yàn)室DIY載體的試劑、時(shí)間和人力成本,大幅提高研究者的載體構(gòu)建效率。

除了DNA載體的分子克隆外,我們還提供多種相關(guān)服務(wù)如質(zhì)粒DNA制備、病毒包裝文庫構(gòu)建、細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建以及治療性IVT RNA合成等。

亮點(diǎn)
Highly-intuitive platform

免費(fèi)、高度直觀的載體設(shè)計(jì)平臺(tái),可幫助您使用我們經(jīng)過驗(yàn)證的海量的庫存載體骨架和載體元件快速定制您所需要的載體。

Modular lego-like  production workflow

樂高式的載體元件組裝流程,可支持定制載體高效且可靠的平行克隆,超過95%的項(xiàng)目如期交付。

Extensive experience

對(duì)于極富挑戰(zhàn)性的載體構(gòu)建項(xiàng)目富有經(jīng)驗(yàn)。

Full ownership of customer s IP

客戶擁有其定制載體的IP并享有6個(gè)月免費(fèi)載體存儲(chǔ)服務(wù)(超過6個(gè)月的載體收取一定基因調(diào)取費(fèi)用)。

服務(wù)詳情
載體構(gòu)建的一般流程
Overview and workflow of custom cloning services

*價(jià)格與基因調(diào)取、骨架、克隆方法相關(guān)。

價(jià)格與周期

超過>80%的載體元件可直接從我們的庫存(基于過去的生產(chǎn)數(shù)據(jù))中調(diào)取,其余則可通過從頭合成、客戶提供的材料(載體骨架和模板)中獲得。我們的定制載體構(gòu)建流程包含了對(duì)客戶材料的QC(若有需要)、調(diào)取載體元件和載體骨架、實(shí)際的載體克隆工作、以及最后的放行前的載體QC。關(guān)于我們的定制載體構(gòu)建服務(wù)的價(jià)格和周期概覽下所示:

常規(guī)載體構(gòu)建服務(wù)

由云舟生物提供的標(biāo)準(zhǔn)化骨架和標(biāo)準(zhǔn)化元件進(jìn)行載體構(gòu)建。

常規(guī)載體的價(jià)格和周期如下:

服務(wù)類型價(jià)格 (CNY)周期*
shRNA載體構(gòu)建¥1,080起4-7 天
gRNA載體(單gRNA)構(gòu)建¥1,080起4-7 天
gRNA載體(雙gRNA)構(gòu)建¥2,380起6-12 天
表達(dá)載體構(gòu)建¥880起3-6 天

* 周期的定義:從接受訂單到發(fā)貨的時(shí)間,不包括客戶準(zhǔn)備材料所需要的時(shí)間(例如提供模板DNA)。腺病毒載體可能需要更長(zhǎng)時(shí)間。

復(fù)雜載體構(gòu)建服務(wù)

復(fù)雜載體是指使用VectorBuilder標(biāo)準(zhǔn)化骨架,但由更為復(fù)雜的需要構(gòu)建的元件組裝而成的載體。它們通常要經(jīng)過多個(gè)步驟來構(gòu)建,并且涉及復(fù)雜的操作過程,例如大片段的擴(kuò)增、多個(gè)片段融合、基因合成和靶向突變等。

復(fù)雜載體的額外價(jià)格和周期:

克隆步驟額外價(jià)格 (CNY)額外周期
插入一個(gè)PCR片段*¥1,180起9-18 天
插入多個(gè)融合PCR片段*¥1,480起10-26 天
基因需要從頭合成**基因合成費(fèi) + 加工費(fèi)14-28天
靶向突變¥1,100/位點(diǎn)7-9 天

對(duì)于克隆上面未列出的其他類型片段,例如高GC片段,簡(jiǎn)單重復(fù)或分段重復(fù)序列,可能需要額外的費(fèi)用和周期。

*對(duì)于7kb<ORF<10kb的,需要額外增加¥1,000 費(fèi)用和 10 天的周期。對(duì)于ORF需要添加promoter、tag或者在其兩端添加酶切位點(diǎn)的,額外費(fèi)用請(qǐng)咨詢。

**對(duì)于<10kb的ORF,合成費(fèi)用將根據(jù)合成的長(zhǎng)度定價(jià)在¥1/bp-¥1.5/bp之間。對(duì)于>10kb的ORF,基因從頭合成的價(jià)格與周期請(qǐng)咨詢。

技術(shù)詳情
質(zhì)量控制(QC)

我們保證所有交付的載體其實(shí)際序列與理論序列100%相符。. 下表展示了我們的載體QC項(xiàng)目。

載體構(gòu)建所用材料
載體骨架載體元件
云舟生物庫存
  • 酶切分析
  • 全長(zhǎng)Sanger測(cè)序
客戶提供材料
  • 酶切分析
  • 全長(zhǎng)Sanger測(cè)序(可選)
  • 全長(zhǎng)Sanger測(cè)序
從頭合成-
  • 全長(zhǎng)Sanger測(cè)序
終載體
  • 酶切分析
  • 全長(zhǎng)Sanger測(cè)序(取決于構(gòu)建方法)
  • NGS(可選)
客戶提供材料

如果客戶選擇自行提供載體構(gòu)建的相關(guān)材料,我們將對(duì)其提供的載體骨架進(jìn)行限制性內(nèi)切酶酶切鑒定,并對(duì)關(guān)鍵區(qū)域進(jìn)行測(cè)序驗(yàn)證。該類載體屬于非標(biāo)準(zhǔn)載體,載體價(jià)格因情況而定。如果需要提供骨架或模板,請(qǐng)按照外來物品接收指南將相應(yīng)材料郵寄給我們。

相關(guān)資源
常見問題解答 視頻 文檔 精選文獻(xiàn) 用戶評(píng)價(jià)
常見問題解答

云舟生物可使用多種策略進(jìn)行載體克隆。在我們的高度優(yōu)化的克隆平臺(tái)上,一般的表達(dá)載體我們使用Gateway克隆和Gibson組裝等方式構(gòu)建,而shRNA和gRNA載體則使用基于直接連接的方式構(gòu)建,價(jià)格低且周期短。此外,根據(jù)具體項(xiàng)目的需要,我們也可以使用從頭基因合成、Golden Gate等方式構(gòu)建載體。

云舟生物構(gòu)建的質(zhì)粒載體的宿主菌通常為VB UltraStable™,一種轉(zhuǎn)化效率高(>1x109 cfu/ug)并可用于擴(kuò)增不穩(wěn)定重復(fù)序列的菌株。因此,我們也高度推薦您使用我們的VB UltraStable™化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞以用于您的載體擴(kuò)增實(shí)驗(yàn)。我們也提供其它宿主菌,如DH5α和Stbl3,可滿足多樣的實(shí)驗(yàn)需要。

質(zhì)粒上的復(fù)制起點(diǎn)屬于低拷貝型

質(zhì)粒的拷貝數(shù)是由質(zhì)粒上的復(fù)制起點(diǎn)決定的,有的復(fù)制起始點(diǎn)屬于低拷貝型。請(qǐng)確認(rèn)質(zhì)粒上復(fù)制起點(diǎn)類型。對(duì)于低拷貝質(zhì)粒,則需要擴(kuò)大細(xì)菌培養(yǎng)量以獲得足夠的質(zhì)粒DNA。

進(jìn)一步了解不同載體復(fù)制起點(diǎn)的拷貝數(shù)

用于質(zhì)粒提取的菌量過少

請(qǐng)檢查確認(rèn)質(zhì)粒制備柱的結(jié)合容量以及您的質(zhì)粒是高拷貝還是低拷貝質(zhì)粒。對(duì)于小量提取,我們建議您收集1-5 ml過夜培養(yǎng)菌液。對(duì)于大量提取,如果質(zhì)粒是高拷貝,我們推薦使用100-150 ml過夜培養(yǎng)菌液;如果是低拷貝,我們推薦使用300-500 ml過夜培養(yǎng)菌液。一般情況下,對(duì)于高拷貝質(zhì)粒,1 ml的過夜培養(yǎng)菌液可以小量提取約5 ug的質(zhì)粒DNA,150 ml的過夜培養(yǎng)菌液可以提取約500 ug的質(zhì)粒DNA;對(duì)于低拷貝質(zhì)粒(如pET),1 ml過夜培養(yǎng)菌液可以小量提取1.5-2.5 ug質(zhì)粒DNA,150 ml過夜培養(yǎng)菌液可以提取150-200 ug質(zhì)粒DNA。

只有小部分菌體含有質(zhì)粒

有的抗生素,尤其是氨芐青霉素,在液體培養(yǎng)中會(huì)快速降解,導(dǎo)致不含質(zhì)粒的細(xì)菌可以大量繁殖,最終使得質(zhì)粒制備產(chǎn)量低。為了避免這種情況,請(qǐng)?jiān)谑褂们靶迈r制備含氨芐青霉素的生長(zhǎng)培養(yǎng)基,并確保提供足夠的濃度。另外,在培養(yǎng)具有氨芐抗性的細(xì)菌時(shí),請(qǐng)不要讓菌液飽和培養(yǎng)時(shí)間過長(zhǎng)。因?yàn)殡S著培養(yǎng)時(shí)間的增加,培養(yǎng)基的抗生素會(huì)越來越少,許多細(xì)菌細(xì)胞也已死亡且它們所含的質(zhì)粒DNA會(huì)被降解,所以從過飽和培養(yǎng)的菌液中提取的質(zhì)粒DNA產(chǎn)量會(huì)低。請(qǐng)從新鮮菌液提取質(zhì)粒DNA,如果不能立即進(jìn)行質(zhì)粒制備,則可以將菌體離心沉淀,并儲(chǔ)存于-80°C冰箱中備用。

直接取甘油菌進(jìn)行接菌培養(yǎng)

直接將接收到的甘油菌或穿刺菌進(jìn)行接種,可能會(huì)偶爾出現(xiàn)質(zhì)粒制備產(chǎn)量低的情況。我們建議先在含有適當(dāng)抗生素的LB平板上劃線,然后挑取單菌落接種到含有相應(yīng)抗生素的新鮮液體培養(yǎng)基中。具體操作說明請(qǐng)?jiān)诓藛螜?ldquo;資源中心>說明書/MSDS>甘油菌”進(jìn)行查看。

沒有正確使用質(zhì)粒提取試劑盒

請(qǐng)?jiān)谑褂们白屑?xì)閱讀質(zhì)粒制備試劑盒使用說明書,防止不當(dāng)操作。

質(zhì)粒制備柱質(zhì)量較差

某些品牌的質(zhì)粒DNA制備柱質(zhì)量較差,請(qǐng)及時(shí)檢測(cè)更換相應(yīng)試劑盒。

當(dāng)我們對(duì)客戶材料進(jìn)行QC時(shí),如果發(fā)現(xiàn)序列有突變,我們會(huì)主動(dòng)聯(lián)系您以確認(rèn)是否仍然進(jìn)行載體構(gòu)建。如果突變屬于同義突變,則通常不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。如果突變屬于非同義突變,我們會(huì)與您溝通在載體構(gòu)建和下游實(shí)驗(yàn)前最佳的處理方案。

甘油菌使用說明

載體家構(gòu)建的質(zhì)粒載體一般以甘油菌形式交付。關(guān)于甘油菌的使用可參考以下視頻內(nèi)容:

精選文獻(xiàn)

載體設(shè)計(jì)
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