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載體設(shè)計與克隆
重組病毒包裝
特色服務(wù)
CRO服務(wù)
CDMO服務(wù)
產(chǎn)品
COVID-19
冠狀病毒解決方案
進一步了解 >> 我們的質(zhì)量體系通過ISO 9001認證。這些產(chǎn)品是在我們先進的設(shè)施中嚴格控制下生成的。

重組蛋白表達

云舟生物提供的重組蛋白表達服務(wù)采用多種表達平臺，適用于多類應(yīng)用場景，包括蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析、酶活測定、藥物開發(fā)、醫(yī)學診斷以及生物工程等。我們的定制重組蛋白表達載體和蛋白表達流程經(jīng)過高度優(yōu)化，可生產(chǎn)高質(zhì)量的重組蛋白。此外，我們還可以接收客戶提供的載體用于生產(chǎn)重組蛋白。

亮點
  • 一站式解決方案： 從載體設(shè)計到大規(guī)模重組蛋白生產(chǎn)
  • 綜合性平臺： 可靈活選擇多種表達系統(tǒng)
  • 定制化服務(wù)： 直觀易用的線上載體設(shè)計平臺上可自由添加各種蛋白標簽
  • 高質(zhì)量： 可提供多種類型的純化方法以及質(zhì)量控制項目
重組蛋白表達系統(tǒng)
重組蛋白表達的一般流程
Recombinant protein expression service
常見問題解答

每一種重組蛋白表達系統(tǒng)都有其優(yōu)缺點。您需要根據(jù)您的項目選擇最合適的系統(tǒng)。下表對比了不同蛋白表達系統(tǒng)的特點。

重組蛋白表達系統(tǒng)優(yōu)勢不足
細菌
  • 高性價比
  • 周期短
  • 技術(shù)簡單
  • 易于放大生產(chǎn)
  • 高產(chǎn)量
  • 缺少翻譯后修飾
  • 密碼子與真核生物不同
  • 由于包涵體的存在，部分蛋白質(zhì)難以表達
  • 有些蛋白質(zhì)有細胞毒性，抑制細菌生長
哺乳動物細胞
  • 在蛋白質(zhì)的天然條件下進行蛋白表達，有利于蛋白折疊且具有翻譯后修飾
  • 適合分泌型蛋白和膜蛋白的表達
  • 治療性蛋白的首選系統(tǒng)
  • 較長的周期
  • 細胞培養(yǎng)條件苛刻
  • 較難放大生產(chǎn)
  • 胞內(nèi)蛋白表達產(chǎn)量低
昆蟲細胞
  • 提供一定的翻譯后修飾和蛋白折疊
  • 適用于分泌型蛋白、胞內(nèi)蛋白、以及膜蛋白
  • 可用于表達蛋白復合體
  • 對比真核表達系統(tǒng)，蛋白表達量更高
  • 高密度的懸浮細胞培養(yǎng)有利于放大生產(chǎn)
  • 較長的周期
  • 細胞培養(yǎng)條件苛刻
  • 技術(shù)復雜
無細胞系統(tǒng)
  • 高效的蛋白合成技術(shù)，可在3小時內(nèi)制備蛋白
  • 無需活細胞，適合毒性蛋白、復合體、不穩(wěn)定蛋白的生產(chǎn)
  • 適合蛋白的高通量生產(chǎn)和篩選
  • 與自動化生產(chǎn)兼容
  • 易于優(yōu)化表達條件
  • 有限的蛋白修飾類型可選

重組蛋白的生產(chǎn)常需要對蛋白添加標簽。這些標簽通常可以簡化純化過程，改善蛋白質(zhì)水溶性、產(chǎn)量或純度。如果標簽設(shè)置有蛋白酶酶切位點，則可以在純化后將其去除，而酶切的效率因目標蛋白質(zhì)而異。選擇適當?shù)臉撕瀸τ诘鞍椎谋磉_和純化至關(guān)重要。下表概述了常用的蛋白標簽及其優(yōu)缺點。

標簽類型常用系統(tǒng)優(yōu)勢不足
GST細菌、昆蟲細胞
  • 最大程度保持蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)
  • 可使用溫和條件純化
  • 容易切割
  • 增強蛋白質(zhì)的水溶性
  • 標簽分子量大
  • 二聚化可能會影響目的蛋白
  • 不適用于需要變性純化的蛋白質(zhì)
His全部
  • 標簽分子量小，對蛋白質(zhì)影響小
  • 對于使用金屬螯合親和色譜
  • 純化成本較低
  • 適用于變性純化
  • 純化時可能會同時帶有其它內(nèi)源性的金屬親和性蛋白，因此需要優(yōu)化純化條件
  • 對蛋白折疊和水溶性沒有幫助
SUMO細菌、昆蟲細胞
  • 可幫助蛋白折疊
  • 可增強蛋白的水溶性，有利于表達
  • 可能會被細菌蛋白非特異性切割
  • 不適用于需要變性純化的蛋白質(zhì)
Flag哺乳動物細胞、昆蟲細胞
  • 標簽分子量小，對蛋白質(zhì)影響小
  • 容易檢測
  • 非特異性結(jié)合少
  • 純化效率低
MBP細菌、昆蟲細胞
  • 可增強蛋白的水溶性，有利于表達
  • 標簽分子量大
  • 不適用于需要變性純化的蛋白質(zhì)
Fc哺乳動物細胞、昆蟲細胞
  • 哺乳動物細胞、昆蟲細胞
  • 適用于分泌型蛋白
  • 標簽分子量大

云舟生物克隆的所有載體都保證100%的序列準確性。云舟生物生產(chǎn)的所有重組蛋白均經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制（QC）。對于大多數(shù)系統(tǒng)，默認的質(zhì)量控制包括：（1）酶切分析和Sanger測序驗證蛋白質(zhì)表達載體；（2）通過A260/280測量和SDS-PAGE確定蛋白質(zhì)的濃度和純度。下表列出了常見的額外QC項目服務(wù)。這些服務(wù)可根據(jù)具體需求提供。

額外QC項目方法
內(nèi)毒素檢測LAL
蛋白鑒定Western Blot
Intact MS (reduced)
SEC-HPLC
SEC-MALs
蛋白N端測序
宿主蛋白檢測
標簽去除蛋白酶消化
動力學和親和性分析Octet
Biacore
針對嚙齒類動物的病原體檢測

云舟生物提供多種蛋白質(zhì)純化方法，包括尺寸排阻色譜（凝膠過濾）、親和色譜、離子交換色譜和疏水相互作用色譜。對于帶有His標簽或GST標簽的重組蛋白，通常使用親和色譜，而對于無標簽的重組蛋白，通常使用尺寸排阻色譜法（凝膠過濾）。純化方法將基于構(gòu)建的載體設(shè)計和蛋白質(zhì)特性進行選擇。

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