圖2 小鼠轉(zhuǎn)導(dǎo)螢光素酶 mRNA（Luc mRNA），檢測(cè) mRNA 表達(dá)情況和免疫反應(yīng)。（A）注射后 6 h、24 h、和 48 h 通過活體成像檢測(cè)螢光素酶活性。（B）為量化外源 RNA 在小鼠中引發(fā)的炎癥反應(yīng)，注射后 48 小時(shí)檢測(cè)小鼠血清中兩種促炎細(xì)胞因子 IL-6 和 TNF-α 的濃度。誤差線表示標(biāo)準(zhǔn)偏差。小鼠種系：C57BL/6J；小鼠年齡：8 周；注射方法：肌肉注射。（C）向 Balb/C 小鼠注射 30 ug 的 LNP 包封的 mRNA，注射后 14 天，分離 Balb/C 小鼠的脾臟細(xì)胞，針對(duì)病毒抗原 A、病毒抗原 B 以及 PBS 對(duì)照進(jìn)行 IFN-γ ELISpot 試驗(yàn)。

圖3 hSpCa9 IVT mRNA在體外的基因編輯效果。（A）向表達(dá)EGFP的HEK293T細(xì)胞轉(zhuǎn)染打靶RGFP的gRNA以及經(jīng)過N1-甲基假尿苷（m1Ψ）修飾的hSpCas9 IVT mRNA。（B）通過顯微鏡（100X）觀察無(wú)轉(zhuǎn)染的（NC）以及轉(zhuǎn)染的兩組細(xì)胞。（C）流式細(xì)胞術(shù)定量檢測(cè)熒光強(qiáng)度。（D）轉(zhuǎn)染后48或72 h，轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞相對(duì)NC減少了約40%的EGFP表達(dá)量。（E和F）基因編輯效果通過T7E1酶切（E）和Sanger測(cè)序確認(rèn)（F）。高亮表示的腺嘌呤表明了在靶序列的插入突變。

圖4 IVT嵌合抗原受體（CAR）mRNA在293T細(xì)胞中的表達(dá)驗(yàn)證。（A）使用m1Ψ修飾的與無(wú)修飾的CD19 CAR mRNA轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，這些mRNA均具有完整性良好的5’/3’ UTR以及poly(A)。（B）轉(zhuǎn)染后24 h，將細(xì)胞與PE標(biāo)記的人源CD19共孵育，F(xiàn)ACS檢測(cè)CAR表達(dá)。（C）使用anti-CD3zeta 抗體和WB進(jìn)一步檢測(cè)CAR表達(dá)。