價(jià)格與周期

* 根據(jù)構(gòu)建的載體設(shè)計(jì)和蛋白質(zhì)特性確定純化方法。 

運(yùn)輸與存儲(chǔ)

我們的載體默認(rèn)以E. coli甘油菌形式交付。根據(jù)需求，我們也可以交付質(zhì)粒DNA，并收取一定的額外費(fèi)用。我們大部分重組蛋白以凍結(jié)的液體形式交付，并以干冰形式運(yùn)輸。接收到重組蛋白后，請(qǐng)將其存儲(chǔ)于-20°C到-80°C的無(wú)菌容器。存儲(chǔ)妥當(dāng)?shù)闹亟M蛋白通?？煞€(wěn)定保存一年。同時(shí)，我們建議對(duì)接收到的重組蛋白進(jìn)行分裝以避免反復(fù)凍融。

質(zhì)量控制

云舟生物克隆的所有載體都保證100%的序列準(zhǔn)確性。云舟生物生產(chǎn)的所有重組蛋白均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制（QC）。對(duì)于大多數(shù)系統(tǒng)，默認(rèn)的質(zhì)量控制包括：（1）酶切分析和Sanger測(cè)序驗(yàn)證蛋白質(zhì)表達(dá)載體；（2）通過A260/280測(cè)量和SDS-PAGE確定蛋白質(zhì)的濃度和純度。下表列出了常見的額外QC項(xiàng)目服務(wù)。這些服務(wù)可根據(jù)具體需求提供。

載體系統(tǒng)

為了在昆蟲系統(tǒng)中表達(dá)重組蛋白，首先需要將目的基因（GOI）克隆到云舟生物的由強(qiáng)啟動(dòng)子控制的pBV載體中。該載體的表達(dá)盒兩側(cè)由Tn7轉(zhuǎn)座子末端元件Tn7L和Tn7R包圍。包含目的基因的載體隨后被轉(zhuǎn)化到攜帶桿粒穿梭載體和輔助質(zhì)粒的大腸桿菌中。桿粒本質(zhì)上是一種非常大的質(zhì)粒，經(jīng)過修飾整合了一個(gè)編碼區(qū)插入有attTn7位點(diǎn)的lacZ基因。輔助質(zhì)粒表達(dá)Tn7轉(zhuǎn)座酶。而轉(zhuǎn)座酶將介導(dǎo)pBV載體上由Tn7R和Tn7L包圍的區(qū)域（包含目的基因的表達(dá)盒和抗性基因）轉(zhuǎn)移到桿狀病毒的attTn7位點(diǎn)。因此，可以通過藥篩和藍(lán)白篩選（lacZ的表達(dá)致使非重組菌落呈藍(lán)色，而由于轉(zhuǎn)座子插入破壞了lacZ表達(dá)，重組菌落則呈白色）來識(shí)別含有重組桿粒的菌落克隆。然后可以使用純化的桿狀病毒DNA轉(zhuǎn)導(dǎo)昆蟲細(xì)胞以產(chǎn)生活桿狀病毒（P1）。然后將P1桿狀病毒在昆蟲細(xì)胞中擴(kuò)增以達(dá)到合適的滴度。這些病毒可用于繼續(xù)感染昆蟲細(xì)胞以生產(chǎn)目的重組蛋白。

對(duì)于桿狀病毒重組蛋白載體的更多信息，請(qǐng)參照我們的載體指南。

圖1 桿狀病毒重組蛋白表達(dá)載體圖譜

案例研究

圖2 利用昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)生產(chǎn)的重組蛋白。（A）SDS-PAGE結(jié)果展示了重組蛋白的分子量，純度≥95%。（B）通過SEC-HPLC測(cè)定純度為≥95%。（C）通過細(xì)胞生長(zhǎng)試驗(yàn)測(cè)定重組蛋白的生物活性。ED50介于2和11 ng/ml之間。

客戶提供載體

如需客戶提供載體，則請(qǐng)按照外來物品接收指南將載體寄送給我們。請(qǐng)嚴(yán)格按照我們的指南來進(jìn)行裝運(yùn)以免造成物品的任何延誤和損壞。客戶提供的所有材料均需經(jīng)過QC檢測(cè)，每一份材料附加檢測(cè)費(fèi)用。請(qǐng)注意，客戶提供物品接收并通過QC之后生產(chǎn)才正式開始。