細(xì)菌在特定狀態(tài)下可吸收環(huán)境中的DNA,這種狀態(tài)稱之為感受態(tài)(competence)。自然條件下的細(xì)菌吸收外源遺傳物質(zhì)可適應(yīng)外界不良環(huán)境的影響,但并非所有類型的菌株均有此能力。大腸桿菌(E. coli)是實驗室常用細(xì)菌類型。處于對數(shù)生長期的大腸桿菌更容易形成感受態(tài)。為了滿足實驗需求,人們通常使用理化方式誘導(dǎo)工程菌菌株產(chǎn)生感受態(tài), 可以更有效地控制外源DNA的導(dǎo)入。常用轉(zhuǎn)化方法有化學(xué)和電轉(zhuǎn)兩種(chemical transformation and electroporation)。對一般克隆實驗來講,化學(xué)轉(zhuǎn)化實驗操作起來更簡易,不需要電轉(zhuǎn)設(shè)備和耗材。
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產(chǎn)品描述
VB UltraStable™ 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞(chemically competent cells)產(chǎn)品中的陽離子(cation)能中和細(xì)胞膜表面負(fù)電荷與質(zhì)粒DNA分子自帶的負(fù)電荷,從而減少兩者之間的互斥作用,讓兩者的接近更加容易。此外,被中和了的質(zhì)粒DNA由于分子內(nèi)缺少了負(fù)電荷排斥力,更傾向折疊成球型結(jié)構(gòu),而不是線性形態(tài),更容易通過細(xì)胞膜。低溫處理有助于降低細(xì)胞膜流動性,并使得膜表面的LPS(O-polysaccharide)整齊排列,讓質(zhì)粒DNA更容易附著于細(xì)胞膜。一旦DNA附著于膜表面,此時熱激,細(xì)胞膜流動性增加,附著的質(zhì)粒DNA分子進入細(xì)胞內(nèi)。此時再次低溫處理,細(xì)胞膜流動性再次降低,胞內(nèi)的質(zhì)粒DNA分子被鎖住。
VB UltraStable™ 化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞是一款經(jīng)過優(yōu)化的高轉(zhuǎn)化效率產(chǎn)品,突變了合成LPS的galE基因,使其LPS變少,更容易捕獲DNA,轉(zhuǎn)化效率可達>109 cfu/ug。
特點
- 適用于篩選和擴增含有重復(fù)序列的質(zhì)粒,例如慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和腺相關(guān)病毒載體。
- 攜帶突變的recA基因,避免同源序列之間的重組。
- 攜帶突變的endA基因,避免提取的質(zhì)粒DNA含有核酸內(nèi)切酶I污染。
- 攜帶突變的fhuA基因,使該菌株抗噬菌體T1。
- 有效轉(zhuǎn)化真核來源的甲基化DNA,以及PCR、cDNA等來源的非基甲基化DNA(mcrA-, Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC))。
- ccdB敏感型,適合Gateway克隆產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化。
- 表達lacZ基因的omega片段,適合含有alpha片段的載體的藍白斑篩選。
菌種類別
E.coli K-12
基因型
F’[?ccdAB proAB+ lacIq lacZ?M15 zzf::Tn10 (TetR)] recA1 endA1 fhuA mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) Φ80dlacZ?M15 ?(ara, leu)7697 araD139 ?lacX74 galK16 galE15 e14- relA1 nupG rpsL (StrR) rph spoT1
運輸條件
干冰
存儲
-80°C(化學(xué)感受態(tài)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率隨存儲時間增加逐漸降低,推薦收到貨后3個月內(nèi)盡快使用以獲得最佳的轉(zhuǎn)化效果)
文檔
使用說明書
VB UltraStableTM chemically competent cells
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