服務詳情
無細胞蛋白合成系統(tǒng)的工作流程從表達載體的設計和構建開始,該載體將用作CFPS中的模板。裂解大腸桿菌細胞,收集粗提取物。含有必要細胞器的裂解液將進一步處理,并補充必要的組分,如能量分子、氨基酸和DNA或mRNA模板,然后啟動體外轉錄和翻譯過程以進行蛋白質合成。從體外翻譯合成蛋白質到蛋白質純化以及QC的過程最快可在1天內完成。
運輸與存儲
我們的載體默認以E. coli甘油菌形式交付。根據需求,我們也可以交付質粒DNA,并收取一定的額外費用。我們大部分重組蛋白以凍結的液體形式交付,并以干冰形式運輸。接收到重組蛋白后,請將其存儲于-20°C到-80°C的無菌容器。存儲妥當的重組蛋白通??煞€(wěn)定保存一年。同時,我們建議對接收到的重組蛋白進行分裝以避免反復凍融。
質量控制
云舟生物克隆的所有載體都保證100%的序列準確性。云舟生物生產的所有重組蛋白均經過嚴格的質量控制(QC)。對于大多數系統(tǒng),默認的質量控制包括:(1)酶切分析和Sanger測序驗證蛋白質表達載體;(2)通過A260/280測量和SDS-PAGE確定蛋白質的濃度和純度。下表列出了常見的額外QC項目服務。這些服務可根據具體需求提供。
額外QC項目 | 方法 |
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內毒素檢測 | LAL |
蛋白鑒定 | Western Blot |
Intact MS (reduced) |
SEC-HPLC |
SEC-MALs |
蛋白N端測序 |
宿主蛋白檢測 |
標簽去除 | 蛋白酶消化n |
動力學和親和性分析 | Octet |
Biacore |
針對嚙齒類動物的病原體檢測 |
技術詳情
案例研究
圖1 (A)利用無細胞蛋白合成系統(tǒng)高通量生產的VHH。SDS-PAGE結果展示了重組蛋白的分子量,純度≥90%。(B)利用無細胞系統(tǒng)合成的scFv。SDS-PAGE結果展示了重組蛋白的分子量,純度≥90%。