病毒包裝
病毒包裝應用
病毒包裝目的在于將目的基因包裝進病毒顆粒,生產具有感染性但沒有致病性的工程化病毒。
病毒包裝技術在應用上具有以下的特點:
- 病毒包裝技術經歷了多年的研究,已趨于成熟,可用于產業(yè)化大量生產
- 病毒基因組的結構簡單、分子背景比較清楚,穩(wěn)定易于改造、易于制備
- 病毒的宿主范圍廣,且具有高效的靶向特異性
- 在目的基因表達方面相對于脂質體介導的基因遞送效果更明顯、長久、穩(wěn)定
- 工程化病毒一般是復制缺陷型的,安全性高
病毒包裝的過程(以慢病毒進行RNAi為例)
1. 根據(jù)目的基因相關信息,構建打靶目的基因序列shRNA的慢病毒載體;
2. 擴增并制備純化的shRNA慢病毒載體;
3. 將shRNA慢病毒載體和病毒包裝質粒共轉染包裝細胞,進行病毒包裝和生產,收集病毒液;
4. 濃縮、純化病毒液;
5. p24 ELISA法測定慢病毒滴度;
6. 用高質量的病毒液感染宿主細胞;檢測基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用抗生素進行穩(wěn)轉細胞株的篩選。通常狀況下,篩選的細胞株具有長期的表達穩(wěn)定性。病毒液足夠用于一般的動物活體實驗。
資料來源:
https://baike.baidu.com/item/%E7%97%85%E6%AF%92%E5%8C%85%E8%A3%85/