腺病毒載體能高效轉(zhuǎn)導(dǎo)大多數(shù)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，并以游離的DNA形式存在于宿主細(xì)胞中。該載體系統(tǒng)是把外源基因?qū)塍w內(nèi)的優(yōu)先使用方法，經(jīng)常用于基因治療和疫苗。

腺病毒載體來(lái)源于誘發(fā)普通感冒的腺病毒，野生型腺病毒基因組是線性雙鏈DNA。

腺病毒重組載體構(gòu)建完成后轉(zhuǎn)染進(jìn)入包裝細(xì)胞。在包裝過(guò)程中，位于兩個(gè)反向重復(fù)序列（ITRs）之間的DNA片段與由包裝細(xì)胞表達(dá)的病毒蛋白進(jìn)一步包裝成病毒顆粒。

當(dāng)病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主細(xì)胞時(shí)，兩個(gè)ITR之間的外源DNA及病毒基因組一起進(jìn)入細(xì)胞，并以游離DNA的形式存在于細(xì)胞核中。

通過(guò)改造優(yōu)化，我們的腺病毒載體缺失了E1A、E1B和E3區(qū)，前兩者與病毒包裝相關(guān)（這兩個(gè)基因已被整合到包裝細(xì)胞的基因組中）。因此，運(yùn)用我們的病毒載體包裝出來(lái)的病毒是復(fù)制缺陷型的（只能轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞而不能自我復(fù)制），大大提高了生物安全性。

關(guān)于腺病毒基因表達(dá)載體的更多信息，請(qǐng)參考以下文獻(xiàn)。

我們的載體來(lái)源于血清5型腺病毒（Ad5）。經(jīng)優(yōu)化，該載體在大腸桿菌體內(nèi)具有很高的拷貝數(shù)，包裝出來(lái)的病毒具有高滴度，能有效轉(zhuǎn)導(dǎo)靶細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)外源基因的高水平表達(dá)。

對(duì)宿主基因組造成破壞的低風(fēng)險(xiǎn)性：在轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn)入靶細(xì)胞后，腺病毒載體在細(xì)胞核保持著游離DNA的狀態(tài)，可以降低宿主基因組被破壞而致癌的風(fēng)險(xiǎn)，使其成為人類體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的理想載體。

超高病毒滴度：腺病毒可通過(guò)再次轉(zhuǎn)導(dǎo)包裝細(xì)胞而得到大量擴(kuò)增，從而獲得超高滴度病毒，慢病毒載體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體和AAV載體都不具有這個(gè)特性。我們提供的腺病毒滴度可以達(dá)到>10¹² VP/ml。

宿主范圍廣泛：來(lái)源于人、小鼠和大鼠等常用哺乳動(dòng)物細(xì)胞都能被腺病毒載體轉(zhuǎn)導(dǎo)，但某些細(xì)胞類型則比較難轉(zhuǎn)導(dǎo)（見(jiàn)下文不足之處）。

載體容量大：腺病毒能有效包裝的基因組上限大小是?38.7 kb（從5' ITR到3' ITR）。在除去腺病毒包裝表達(dá)所需主要元件所占用的容量之后，我們的載體具有約?7.5 kb的裝載空間以容納目的DNA（例如啟動(dòng)子，ORF和熒光標(biāo)記）。相比起容量為6.4 kb的慢病毒表達(dá)載體，腺病毒載體容量更大，能滿絕大多數(shù)應(yīng)用要求。

體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)均有效：我們的載體不僅能用于體內(nèi)活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，還具有體外細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)能力。

安全性：為了確保腺病毒載體的生物安全性，我們的腺病毒載體缺失了病毒包裝所必須的基因（這些基因被整合到包裝細(xì)胞的基因組）。 所以，利用我們的腺病毒載體包裝出來(lái)的病毒是復(fù)制缺陷型的，并且只有在包裝細(xì)胞中才具有復(fù)制能力。

載體DNA非整合型：腺病毒基因組不會(huì)整合到靶細(xì)胞的基因組中，而是以游離DNA的形式存在，并且隨著時(shí)間推移逐漸丟失，特別是在分裂細(xì)胞中。

難以轉(zhuǎn)導(dǎo)特定類型的細(xì)胞：雖然我們的腺病毒載體可以轉(zhuǎn)導(dǎo)很多類型的細(xì)胞包括非分裂細(xì)胞，但對(duì)某些特定類型的細(xì)胞如內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、呼吸上皮分化細(xì)胞、外周血細(xì)胞、神經(jīng)元和造血干細(xì)胞等，卻無(wú)法進(jìn)行有效的轉(zhuǎn)導(dǎo)。

較強(qiáng)的免疫原性：活腺病毒會(huì)在動(dòng)物體內(nèi)引起強(qiáng)烈的免疫反應(yīng)，從而限制了其在體內(nèi)的某些應(yīng)用。

技術(shù)復(fù)雜：使用腺病毒載體時(shí)，需要在包裝細(xì)胞中產(chǎn)生活病毒，然后測(cè)定病毒滴度。這些過(guò)程技術(shù)難度更高，周期更長(zhǎng)。

5' ITR: 5' inverted terminal repeat. In wild type virus, 5' ITR and 3' ITR are essentially identical in sequence. They reside on two ends of the viral genome pointing in opposite directions, where they serve as the origin of viral genome replication.

Ψ: Adenovirus packaging signal required for the packaging of viral DNA into virus.

Promoter: The promoter that drives your gene of interest is placed here.

Kozak: Kozak consensus sequence. It is placed in front of the start codon of the ORF of interest because it is believed to facilitate translation initiation in eukaryotes.

ORF: The open reading frame of your gene of interest is placed here.

BGH pA: Bovine growth hormone polyadenylation. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.

hPGK promoter: Human phosphoglycerate kinase 1 gene promoter. It drives the ubiquitous expression the downstream marker gene.

Marker: A visually detectable gene (such as EGFP). This allows cells transduced with the vector to be selected and/or visualized.

TK pA: Herpes simplex virus thymidine kinase polyadenylation signal. It facilitates transcriptional termination of the upstream ORF.

ΔAd5: Portion of Ad5 genome between the two ITRs minus the E1A, E1B and E3 regions.

3' ITR: 3' inverted terminal repeat.

pBR322 ori: pBR322 origin of replication. Plasmids carrying this origin exist in medium copy numbers in E. coli.

Ampicillin: Ampicillin resistance gene. It allows the plasmid to be maintained by ampicillin selection in E. coli.

PacI: PacI restriction site (PacI is a rare cutter that cuts at TTAATTAA). The two PacI restriction sites on the vector can be used to linearize the vector and remove the vector backbone from the viral sequence, which is necessary for efficient packaging.