在VectorBuilder主頁上，點(diǎn)擊“設(shè)計(jì)我的載體”，進(jìn)入“選擇載體系統(tǒng)”頁面。在這個(gè)頁面上羅列了所有可供選擇的載體系統(tǒng)，選擇您需要的載體類型后，點(diǎn)擊旁邊的“現(xiàn)在去設(shè)計(jì)”按鈕即可。例如，如果您要設(shè)計(jì)一個(gè)在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)目的基因的慢病毒載體，則點(diǎn)擊“哺乳動(dòng)物基因表達(dá)載體”—“慢病毒”—“現(xiàn)在去設(shè)計(jì)”。

詳細(xì)的載體系統(tǒng)技術(shù)信息可查看“載體系統(tǒng)指南”。

當(dāng)您選擇一個(gè)載體系統(tǒng)后，您將進(jìn)入到“載體設(shè)計(jì)頁面”。在這里，您將看到可選擇元件的載體圖譜。圖譜上標(biāo)記了兩種類型的元件，其中一部分是固定的載體骨架，一部分由您自由添加，例如基因表達(dá)的啟動(dòng)子、ORF或其他元件（如藥物篩選標(biāo)記或熒光報(bào)告基因），您按順序輸入添加即可。當(dāng)在載體上添加一個(gè)元件時(shí)，您可以選擇VectorBuilder的元件數(shù)據(jù)庫，也可以自己輸入序列。當(dāng)添加ORF時(shí)，您可以選擇插入蛋白標(biāo)簽或引入突變。以下是使用小提示：

如何從數(shù)據(jù)庫中選擇元件：我們含有兩種類型的元件數(shù)據(jù)庫。一類是羅列在網(wǎng)頁上的常用元件庫（例如常用的啟動(dòng)子CMV、EF1A、CAG等），另一類是基于基因的數(shù)據(jù)庫（例如ORF、shRNA和gRNA），您可以通過檢索基因名和物種來獲得您感興趣的基因元件。例如，當(dāng)您要設(shè)計(jì)一個(gè)表達(dá)人類BMP2基因的慢病毒載體時(shí)，在“插入ORF”的步驟中點(diǎn)擊“選擇ORF數(shù)據(jù)庫”并搜索人類BMP2，搜索結(jié)果會(huì)列出這個(gè)基因所有的RedSeq轉(zhuǎn)錄本，其中有一個(gè)是VectorBuilder推薦的。您可以選擇任一轉(zhuǎn)錄本的ORF序列添加到您的載體中，也可以編輯后再添加（如插入表位標(biāo)簽或引入突變等）。

詳細(xì)的載體元件信息可查看“載體元件指南”。

如何使用ORF編輯功能：您可以在開放閱讀框內(nèi)插入表位標(biāo)簽或引入突變，也可以添加到載體之后再做修改。您只需要在載體圖譜上點(diǎn)擊已插入ORF，選擇下拉菜單中的“編輯ORF”，就可以打開序列編輯窗口并進(jìn)行修改操作。點(diǎn)擊序列下面的“添加標(biāo)簽”按鈕，您將看到一系列常用的標(biāo)簽。您可以將它們添加在開放閱讀框的N端或C端，您也可以輸入或刪除核苷酸直接編輯序列。當(dāng)您要編輯VectorBuilder數(shù)據(jù)庫中自帶的元件時(shí)，所有的編輯歷史都會(huì)被記錄。在序列編輯窗口，您還可以使用其他便捷的功能，例如翻譯，查找開放閱讀框，查看反向互補(bǔ)鏈等。

如何將多個(gè)ORF置于同一個(gè)啟動(dòng)子下游：當(dāng)您設(shè)計(jì)一個(gè)基因表達(dá)載體時(shí)，您最多可以在同一個(gè)啟動(dòng)子下游放置4個(gè)ORF作為多順反子表達(dá)框。您可以使用融合蛋白，也可以使用2A肽或IRES連接子。您可以通過點(diǎn)擊“載體設(shè)計(jì)頁面”左上角的“選擇插入基因的個(gè)數(shù)”來設(shè)置位于同一個(gè)啟動(dòng)子下游的ORF個(gè)數(shù)。