使用表達目的基因的桿狀病毒感染高密度昆蟲細胞，是一種通用且強大的真核生物重組蛋白表達系統(tǒng)。昆蟲表達系統(tǒng)保留了大多數(shù)真核翻譯后修飾和蛋白質(zhì)折疊的特性，因此是生產(chǎn)激酶和類固醇受體的首選方法。當這些蛋白在細菌細胞中生產(chǎn)時，由于缺少適當?shù)牧姿峄蛘郫B，可能會導致其失去活性。
亮點
| 服務 | 簡介 | 交付內(nèi)容 | 價格（CNY） | 周期 |
|---|---|---|---|---|
| 載體設計與克隆 | 為目的基因選擇合適的融合標簽、純化標簽，進行密碼子優(yōu)化。構(gòu)建含有目的基因的桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體，如pBV。 | E. coli甘油菌 | ￥1,180起 | 1-2周 |
| 蛋白小量表達和純化 | 包裝桿狀病毒并擴增。桿狀病毒轉(zhuǎn)導昆蟲細胞（如SF9或Hi-5）進行重組蛋白表達純化*，并進行QC。 |
| ￥12,800起 | 7-8周 |
| 蛋白大規(guī)模表達與純化 | 大規(guī)模生產(chǎn)并純化重組蛋白。 |
| 請咨詢 | |
* 根據(jù)構(gòu)建的載體設計和蛋白質(zhì)特性確定純化方法。
我們的載體默認以E. coli甘油菌形式交付。根據(jù)需求，我們也可以交付質(zhì)粒DNA，并收取一定的額外費用。我們大部分重組蛋白以凍結(jié)的液體形式交付，并以干冰形式運輸。接收到重組蛋白后，請將其存儲于-20°C到-80°C的無菌容器。存儲妥當?shù)闹亟M蛋白通?？煞€(wěn)定保存一年。同時，我們建議對接收到的重組蛋白進行分裝以避免反復凍融。
云舟生物克隆的所有載體都保證100%的序列準確性。云舟生物生產(chǎn)的所有重組蛋白均經(jīng)過嚴格的質(zhì)量控制（QC）。對于大多數(shù)系統(tǒng)，默認的質(zhì)量控制包括：（1）酶切分析和Sanger測序驗證蛋白質(zhì)表達載體；（2）通過A260/280測量和SDS-PAGE確定蛋白質(zhì)的濃度和純度。下表列出了常見的額外QC項目服務。這些服務可根據(jù)具體需求提供。
| 額外QC項目 | 方法 |
|---|---|
| 內(nèi)毒素檢測 | LAL |
| 蛋白鑒定 | Western Blot |
| Intact MS (reduced) | |
| SEC-HPLC | |
| SEC-MALs | |
| 蛋白N端測序 | |
| 宿主蛋白檢測 | |
| 標簽去除 | 蛋白酶消化 |
| 動力學和親和性分析 | Octet |
| Biacore | |
| 針對嚙齒類動物的病原體檢測 | |
為了在昆蟲系統(tǒng)中表達重組蛋白，首先需要將目的基因（GOI）克隆到云舟生物的由強啟動子控制的pBV載體中。該載體的表達盒兩側(cè)由Tn7轉(zhuǎn)座子末端元件Tn7L和Tn7R包圍。包含目的基因的載體隨后被轉(zhuǎn)化到攜帶桿粒穿梭載體和輔助質(zhì)粒的大腸桿菌中。桿粒本質(zhì)上是一種非常大的質(zhì)粒，經(jīng)過修飾整合了一個編碼區(qū)插入有attTn7位點的lacZ基因。輔助質(zhì)粒表達Tn7轉(zhuǎn)座酶。而轉(zhuǎn)座酶將介導pBV載體上由Tn7R和Tn7L包圍的區(qū)域（包含目的基因的表達盒和抗性基因）轉(zhuǎn)移到桿狀病毒的attTn7位點。因此，可以通過藥篩和藍白篩選（lacZ的表達致使非重組菌落呈藍色，而由于轉(zhuǎn)座子插入破壞了lacZ表達，重組菌落則呈白色）來識別含有重組桿粒的菌落克隆。然后可以使用純化的桿狀病毒DNA轉(zhuǎn)導昆蟲細胞以產(chǎn)生活桿狀病毒（P1）。然后將P1桿狀病毒在昆蟲細胞中擴增以達到合適的滴度。這些病毒可用于繼續(xù)感染昆蟲細胞以生產(chǎn)目的重組蛋白。
對于桿狀病毒重組蛋白載體的更多信息，請參照我們的載體指南。
圖1 桿狀病毒重組蛋白表達載體圖譜
圖2 利用昆蟲桿狀病毒系統(tǒng)生產(chǎn)的重組蛋白。（A）SDS-PAGE結(jié)果展示了重組蛋白的分子量，純度≥95%。（B）通過SEC-HPLC測定純度為≥95%。（C）通過細胞生長試驗測定重組蛋白的生物活性。ED50介于2和11 ng/ml之間。
如需客戶提供載體，則請按照外來物品接收指南將載體寄送給我們。請嚴格按照我們的指南來進行裝運以免造成物品的任何延誤和損壞?？蛻籼峁┑乃胁牧暇杞?jīng)過QC檢測，每一份材料附加檢測費用。請注意，客戶提供物品接收并通過QC之后生產(chǎn)才正式開始。
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