重組蛋白表達(dá)

云舟生物提供的重組蛋白表達(dá)服務(wù)采用多種表達(dá)平臺，適用于多類應(yīng)用場景，包括蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析、酶活測定、藥物開發(fā)、醫(yī)學(xué)診斷以及生物工程等。我們的定制重組蛋白表達(dá)載體和蛋白表達(dá)流程經(jīng)過高度優(yōu)化，可生產(chǎn)高質(zhì)量的重組蛋白。此外，我們還可以接收客戶提供的載體用于生產(chǎn)重組蛋白。

亮點

一站式解決方案： 從載體設(shè)計到大規(guī)模重組蛋白生產(chǎn)
綜合性平臺： 可靈活選擇多種表達(dá)系統(tǒng)
定制化服務(wù)： 直觀易用的線上載體設(shè)計平臺上可自由添加各種蛋白標(biāo)簽
高質(zhì)量： 可提供多種類型的純化方法以及質(zhì)量控制項目

重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)

重組蛋白表達(dá)的一般流程

常見問題解答

我應(yīng)該選用哪一種重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)？▼

每一種重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)都有其優(yōu)缺點。您需要根據(jù)您的項目選擇最合適的系統(tǒng)。下表對比了不同蛋白表達(dá)系統(tǒng)的特點。

重組蛋白表達(dá)系統(tǒng)	優(yōu)勢	不足
細(xì)菌	高性價比周期短技術(shù)簡單易于放大生產(chǎn) 高產(chǎn)量	缺少翻譯后修飾密碼子與真核生物不同由于包涵體的存在，部分蛋白質(zhì)難以表達(dá) 有些蛋白質(zhì)有細(xì)胞毒性，抑制細(xì)菌生長
哺乳動物細(xì)胞	在蛋白質(zhì)的天然條件下進行蛋白表達(dá)，有利于蛋白折疊且具有翻譯后修飾適合分泌型蛋白和膜蛋白的表達(dá) 治療性蛋白的首選系統(tǒng)	較長的周期細(xì)胞培養(yǎng)條件苛刻較難放大生產(chǎn) 胞內(nèi)蛋白表達(dá)產(chǎn)量低
昆蟲細(xì)胞	提供一定的翻譯后修飾和蛋白折疊適用于分泌型蛋白、胞內(nèi)蛋白、以及膜蛋白可用于表達(dá)蛋白復(fù)合體對比真核表達(dá)系統(tǒng)，蛋白表達(dá)量更高高密度的懸浮細(xì)胞培養(yǎng)有利于放大生產(chǎn)	較長的周期細(xì)胞培養(yǎng)條件苛刻技術(shù)復(fù)雜
無細(xì)胞系統(tǒng)	高效的蛋白合成技術(shù)，可在3小時內(nèi)制備蛋白無需活細(xì)胞，適合毒性蛋白、復(fù)合體、不穩(wěn)定蛋白的生產(chǎn) 適合蛋白的高通量生產(chǎn)和篩選與自動化生產(chǎn)兼容易于優(yōu)化表達(dá)條件	有限的蛋白修飾類型可選

我應(yīng)該使用哪一種蛋白標(biāo)簽？▼

重組蛋白的生產(chǎn)常需要對蛋白添加標(biāo)簽。這些標(biāo)簽通?？梢院喕兓^程，改善蛋白質(zhì)水溶性、產(chǎn)量或純度。如果標(biāo)簽設(shè)置有蛋白酶酶切位點，則可以在純化后將其去除，而酶切的效率因目標(biāo)蛋白質(zhì)而異。選擇適當(dāng)?shù)臉?biāo)簽對于蛋白的表達(dá)和純化至關(guān)重要。下表概述了常用的蛋白標(biāo)簽及其優(yōu)缺點。

標(biāo)簽類型	常用系統(tǒng)	優(yōu)勢	不足
GST	細(xì)菌、昆蟲細(xì)胞	最大程度保持蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu) 可使用溫和條件純化容易切割增強蛋白質(zhì)的水溶性	標(biāo)簽分子量大二聚化可能會影響目的蛋白不適用于需要變性純化的蛋白質(zhì)
His	全部	標(biāo)簽分子量小，對蛋白質(zhì)影響小對于使用金屬螯合親和色譜純化成本較低適用于變性純化	純化時可能會同時帶有其它內(nèi)源性的金屬親和性蛋白，因此需要優(yōu)化純化條件對蛋白折疊和水溶性沒有幫助
SUMO	細(xì)菌、昆蟲細(xì)胞	可幫助蛋白折疊可增強蛋白的水溶性，有利于表達(dá)	可能會被細(xì)菌蛋白非特異性切割不適用于需要變性純化的蛋白質(zhì)
Flag	哺乳動物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞	標(biāo)簽分子量小，對蛋白質(zhì)影響小容易檢測非特異性結(jié)合少	純化效率低
MBP	細(xì)菌、昆蟲細(xì)胞	可增強蛋白的水溶性，有利于表達(dá)	標(biāo)簽分子量大不適用于需要變性純化的蛋白質(zhì)
Fc	哺乳動物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞	哺乳動物細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞適用于分泌型蛋白	標(biāo)簽分子量大

云舟生物的重組蛋白QC服務(wù)包括什么？▼

云舟生物克隆的所有載體都保證100%的序列準(zhǔn)確性。云舟生物生產(chǎn)的所有重組蛋白均經(jīng)過嚴(yán)格的質(zhì)量控制（QC）。對于大多數(shù)系統(tǒng)，默認(rèn)的質(zhì)量控制包括：（1）酶切分析和Sanger測序驗證蛋白質(zhì)表達(dá)載體；（2）通過A260/280測量和SDS-PAGE確定蛋白質(zhì)的濃度和純度。下表列出了常見的額外QC項目服務(wù)。這些服務(wù)可根據(jù)具體需求提供。

額外QC項目	方法
內(nèi)毒素檢測	LAL
蛋白鑒定	Western Blot
	Intact MS (reduced)
	SEC-HPLC
	SEC-MALs
	蛋白N端測序
	宿主蛋白檢測
標(biāo)簽去除	蛋白酶消化
動力學(xué)和親和性分析	Octet
動力學(xué)和親和性分析	Biacore
針對嚙齒類動物的病原體檢測

有哪些蛋白純化方法可供選擇？▼

云舟生物提供多種蛋白質(zhì)純化方法，包括尺寸排阻色譜（凝膠過濾）、親和色譜、離子交換色譜和疏水相互作用色譜。對于帶有His標(biāo)簽或GST標(biāo)簽的重組蛋白，通常使用親和色譜，而對于無標(biāo)簽的重組蛋白，通常使用尺寸排阻色譜法（凝膠過濾）。純化方法將基于構(gòu)建的載體設(shè)計和蛋白質(zhì)特性進行選擇。

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