水皰性口炎病毒（Vesicular stomatitis virus，VSV）載體在研究病毒顆粒入侵宿主細胞、辨認介導病毒感染細胞的細胞表面受體、篩選抑制病毒藥物以及疫苗開發(fā)方面有著廣泛的應用。VSV病毒載體可以高效地利用非同源的病毒蛋白進行假型化（presudotyped），例如要求使用高生物安全等級的病毒包膜蛋白，因此VSV也是研究高風險病毒細胞侵入機制的理想選擇。 云舟生物開發(fā)了一系列先進的技術(shù)和試劑，大為改進了重組VSV包裝的滴度、純度、可靠性和穩(wěn)定性，特別是結(jié)合了我們的VSV載體克隆系統(tǒng)。
| 生產(chǎn)規(guī)格 | 應用 | 滴度 | 體積 | 價格 | 周期 |
|---|---|---|---|---|---|
| VSV-G蛋白VSV病毒 | |||||
| VSV中量制備 | 細胞培養(yǎng) | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ￥7,780 | 21-35天 |
| VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ￥9,780 | |||
| 超純化VSV中量制備 | 細胞培養(yǎng)和體內(nèi)應用 | >108 PFU/ml | 500 ul (5x100 ul) | ￥11,880 | |
| 超純化VSV大量制備 | 1 ml (10x100 ul) | ￥18,880 | |||
| SARS-CoV-2 S蛋白及其變體的假VSV病毒（轉(zhuǎn)基因為Luc或EGFP） | |||||
| VSV中量制備 | 細胞培養(yǎng) | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ￥15,380 | 21-35天 |
| VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ￥19,580 | |||
| SARS-CoV-2 S蛋白及其變體的假VSV病毒（其它類型轉(zhuǎn)基因） | |||||
| VSV中量制備 | 細胞培養(yǎng) | >107 PFU/ml | 1 ml (10x100 ul) | ￥15,380 | 21-35天 |
| VSV大量制備 | >108 PFU/ml | ￥19,580 | |||
云舟生物開發(fā)了兩種載體骨架用于克隆VSV基因組。兩個骨架均包含有活性的VSV基因組成分，但是不含有G糖蛋白。第一個載體包含VSV-M和VSV-L基因，可以被用于克隆您的目的基因（圖1a）。第二個載體在VSV-N基因上游增加了一個報告基因（圖1b）。如果您還需要其它版本的載體，請聯(lián)系我們。
圖1 VSV載體骨架，包含VSV N-P-M-L基因
| 非純化VSV制備服務 | 純化VSV制備服務 | |
| 交付內(nèi)容 | 定制病毒，按照規(guī)格交付：
| 定制病毒，按照規(guī)格交付：
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對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應贈送：
| 對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應選購：
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| 病毒重懸液 | HBSS緩沖液 | HBSS緩沖液 |
| 運輸/存儲 | 干冰/-80°C，避免反復凍融 | 干冰/-80°C，避免反復凍融 |
| 推薦應用 | 體外培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)導 | 體外培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)導、動物體內(nèi)細胞轉(zhuǎn)導 |
對照病毒
為了更好地開展您的實驗，我們按照“對照病毒與定制病毒的生物學應用相匹配”的原則給您贈送或者推薦對照病毒。例如，如果定制病毒表達一個基因，則推薦的對照病毒表達熒光蛋白EGFP。如果定制病毒表達打靶某個基因的shRNA，則對照病毒表達一個Scramble shRNA。推薦的對照病毒信息如下表所示：
| 對照病毒 | 對照載體名稱 | 對照載體ID | 定制病毒 |
| EGFP對照VSV病毒 | pVSV[Exp]-EGFP | VB010000-9315gcp | 哺乳動物基因表達VSV病毒 |
我們的VSV病毒存儲在HBSS緩沖液中，并采用干冰運輸。收到VSV病毒后，請立即放置于-80℃，長期貯存至少6個月。VSV病毒的保質(zhì)期約為一年。請避免反復凍融，因為這會導致慢病毒滴度大幅下降。
圖2 典型的VSV病毒包裝流程
對于我們生產(chǎn)的每一個重組VSV病毒，質(zhì)量控制包括滴度檢測、無菌測試、支原體檢測等。如果VSV病毒載體表達熒光蛋白，則我們會進行熒光轉(zhuǎn)導測試。如果VSV病毒載體含有藥篩標記，我們也會在轉(zhuǎn)導測試后伴隨進行藥篩測試。此外，對于超純化VSV，我們會進行內(nèi)毒素檢測。
我們開發(fā)了一系列技術(shù)用以優(yōu)化我們的VSV包裝流程。經(jīng)優(yōu)化后我們的病毒展現(xiàn)出對比已公開的方案具備更高的轉(zhuǎn)導效率（圖3）。
圖3 VSV-G糖蛋白覆蓋的VSV轉(zhuǎn)導BHK-21細胞。轉(zhuǎn)導前與轉(zhuǎn)導后24小時分別拍攝。倍數(shù)：100x。左：白光。右：GFP。
此外，我們針對新冠S蛋白（及其D614G突變體）VSV假病毒進行大量的試驗驗證。結(jié)果表明新冠S蛋白（及其D614G突變體）VSV假病毒可以有效轉(zhuǎn)導高表達hACE2的BHK-21細胞，但較難轉(zhuǎn)導低水平表達hACE2的BHK-21細胞（圖4）。因此我們推薦使用我們的ACE2表達細胞株進行新冠S蛋白假病毒或VSV-G假病毒的轉(zhuǎn)導實驗。
圖4 新冠S蛋白假病毒VSV轉(zhuǎn)導BHK-21和BHK-21-ACE2細胞
暫無
使用說明書
我們使用噬斑試驗測定VSV病毒滴度。簡單來說，即是對單層的易感細胞進行病毒轉(zhuǎn)導，并在培養(yǎng)皿中覆蓋一層瓊脂以限制病毒的擴散。每個被感染的細胞都將裂解并進一步造成其周邊接觸的細胞被感染，最終在培養(yǎng)皿上形成一個噬斑。每個噬斑來源于一個VSV病毒顆粒，因此可以通過計算噬斑的數(shù)量來換算出VSV滴度。
載體家生產(chǎn)的重組VSV病毒是復制缺陷型的，刪除了包膜上的G糖蛋白表達基因。我們制備的VSV假病毒使用異源病毒的包膜蛋白，包括一些來源于需要被高度隔離的病毒類型。重組VSV不能進行額外的復制，在BSL2等級的實驗室中也能操作。因此我們生產(chǎn)的重組VSV特別適合用于在普通實驗室研究高風險性病毒的由其包膜蛋白介導的細胞感染機制。
交付周期是指訂單接收到發(fā)貨之間的時間，不包括需要客戶提供任何物料（如病毒載體）的等待時間。
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