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進(jìn)一步了解 >> 我們的質(zhì)量體系通過ISO 9001認(rèn)證。這些產(chǎn)品是在我們先進(jìn)的設(shè)施中嚴(yán)格控制下生成的。

點突變細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株

云舟生物的點突變細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株可針對細(xì)胞基因組靶序列創(chuàng)造點突變。我們的點突變細(xì)胞采用CRISPR相關(guān)技術(shù)制備,需要針對轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞的靶序列導(dǎo)入一個特異性的gRNA/Cas9 RNP復(fù)合物,以及一個可通過HDR修復(fù)方式引入突變序列模板的供體載體。我們擁有一系列獨特的技術(shù),可讓我們在很短的周期內(nèi)實現(xiàn)具有高HDR率的高效基因遞送,高成功率獲得敲入純合子。

亮點:

  • 超高點突變效率:使用我們設(shè)計的供體載體和基因遞送方式,靶細(xì)胞的HDR率可達(dá)到50%。
  • 非病毒基因遞送方式:基于電轉(zhuǎn)法的RNP實現(xiàn)高效基因遞送且脫靶率低。
  • 周期短:載體設(shè)計完成后的純合子突變細(xì)胞從改造到交付快至18周。
服務(wù)詳情
Workflow for gene overexpression stable cell line engineering

圖1 點突變細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株的構(gòu)建流程。

訂購信息
服務(wù)交付內(nèi)容價格(CNY)周期
點突變細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建一個純合子單克隆細(xì)胞株(>106個細(xì)胞/管, 2管)¥40,980起 12-18周

* 增加交付單克隆數(shù)將收取額外費用。

QC試驗
試驗項目方法
點突變驗證(默認(rèn))

PCR、Sanger測序

表達(dá)測試(額外收費)RT-qPCR、WB、IF、FACS
脫靶效應(yīng)分析(額外收費)NGS、PCR、Sanger測序
染色體分析(額外收費)核型分析
無菌測試(默認(rèn))PCR檢測支原體、生物負(fù)荷檢測等
下游服務(wù)
對于您的細(xì)胞穩(wěn)轉(zhuǎn)株,我們可以開展多種類型的表型分析和功能驗證,保括細(xì)胞增殖、凋亡、遷移、細(xì)胞活力、細(xì)胞毒性等。
案例分析
Increased point mutation efficiency

圖2 使用我們的點突變方法在不同類型細(xì)胞中測試突變率。

Validation of point mutations in THP-1 cells

圖3 在THP-1細(xì)胞中驗證點突變效果。(A)Sanger測序檢測GOI序列中的點突變。紅色方框的位置是非同義突變,綠色方框的位置是同義突變。(B)對突變細(xì)胞(PM)和野生型細(xì)胞(WT)的靶位點PCR,PCR產(chǎn)物顯示其長度相同,表明點突變沒有引發(fā)序列結(jié)構(gòu)性變異。

常見問題解答

對于小片段插入,ssODN通常是最佳的選擇,具有操作簡易,不會隨機插入等優(yōu)點。然而,ssODN的模板大小只能小于200 bp,對于大片段插入,可以使用dsDNA作為供體序列模板。無論采用哪一種方法,切割位點到突變位點的距離不超過至10 bp(對于ssODN)或者1 kb(對于dsDNA供體)時,可以保證較高的整合效率。

盡管同義突變的氨基酸序列不變,但是會影響密碼子偏好性、mRNA結(jié)構(gòu)、穩(wěn)定性以及翻譯效率。在細(xì)胞株中引入同義突變有助于研究這些轉(zhuǎn)錄后階段可能產(chǎn)生的變化。此外,引入同義突變還可以擾亂CRISPR組分的靶序列(即PAM序列以及其鄰近序列),抑制脫靶效應(yīng)造成和舊CRISPR-Cas9編輯位點造成的非目標(biāo)切割。

相關(guān)服務(wù)

載體構(gòu)建 
慢病毒包裝 
CRISPR基因編輯解決方案 

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