四環(huán)素（Tet）誘導(dǎo)基因表達(dá)系統(tǒng)是控制哺乳動物細(xì)胞基因表達(dá)的有力工具。我們的Tet-On載體系統(tǒng)在沒有四環(huán)素的情況下可實現(xiàn)GOI幾乎完全沉默，而在添加四環(huán)素時GOI快速且高水平表達(dá)。該系統(tǒng)包含多個組分， 其中tTS蛋白在無四環(huán)素的情況下主動沉默GOI，rtTA蛋白在四環(huán)素存在的情況下強烈激活GOI表達(dá)。在沒有四環(huán)素的情況下，TetR（Tet阻遏蛋白）和KRAB-AB（Kid-1蛋白的轉(zhuǎn)錄阻遏結(jié)構(gòu)域）融合產(chǎn)生的tTS蛋白與TRE啟動子結(jié)合，主動抑制基因轉(zhuǎn)錄。另一方面，rtTA 蛋白是一種 rTetR（一種突變型 Tet 阻遏蛋白）和 VP16（單純皰疹病毒蛋白16的轉(zhuǎn)錄激活子結(jié)構(gòu)域）的融合蛋白，僅在四環(huán)素存在的情況下與 TRE 啟動子結(jié)合以激活基因轉(zhuǎn)錄。我們的Tet-Off載體系統(tǒng)在四環(huán)素存在的情況下可通過tTA蛋白與TRE啟動子的結(jié)合來抑制靶基因表達(dá)。