腺病毒載體（Adenovirus）能夠攜帶大片段外源DNA、感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞、誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答（這對(duì)于疫苗開(kāi)發(fā)是有益的）、表現(xiàn)出高效率的轉(zhuǎn)導(dǎo)和高水平的轉(zhuǎn)基因表達(dá)、不整合細(xì)胞DNA（在細(xì)胞內(nèi)保持dsDNA游離體）。這些特性使腺病毒作為用于基因治療的轉(zhuǎn)基因載體、疫苗載體和溶瘤病毒療法中使用的載體。我們開(kāi)發(fā)出一系列專(zhuān)有技術(shù)和試劑，從病毒滴度、純度、活性以及一致性等方面顯著提升了腺病毒包裝工藝水平。

定制病毒，按照定制規(guī)格交付

對(duì)照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對(duì)應(yīng)選購(gòu)

• 超純化病毒小量制備: >10¹¹ VP/ml，5×50 ul
• 超純化病毒中量制備: >10¹¹ VP/ml，10×50 ul
• 超純化病毒大量制備: >10¹¹ VP/ml，10×100 ul

定制病毒，按照定制規(guī)格交付

對(duì)照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對(duì)應(yīng)選購(gòu)

• 超純化病毒小量制備: >10¹¹ VP/ml，5×50 ul
• 超純化病毒中量制備: >10¹¹ VP/ml，10×50 ul
• 超純化病毒大量制備: >10¹¹ VP/ml，10×100 ul

我們的腺病毒制造過(guò)程如下（圖1）。攜帶目的基因（GOI）的腺病毒載體首先需要通過(guò)PacI限制性消化進(jìn)行線性化。線性化的載體DNA被轉(zhuǎn)染到表達(dá)腺病毒基因E1的包裝細(xì)胞中以產(chǎn)生重組腺病毒。腺病毒顆粒被釋放到組織培養(yǎng)基中，然后進(jìn)行收集。對(duì)于超純化腺病毒（體內(nèi)應(yīng)用級(jí)別），病毒顆粒通過(guò)氯化銫（CsCl）梯度超速離心進(jìn)一步純化和濃縮。我們使用基于免疫細(xì)胞化學(xué)的方法通過(guò)檢測(cè)腺病毒特異性六聚體蛋白來(lái)測(cè)量病毒滴度。對(duì)于超純化腺病毒，我們通過(guò)測(cè)量病毒顆粒的光密度（根據(jù)OD260數(shù)值）來(lái)估算滴度。

圖1 Ad5腺病毒的典型生產(chǎn)流程

對(duì)于我們生產(chǎn)的腺病毒，其質(zhì)量控制包括滴度測(cè)定、針對(duì)細(xì)菌和真菌的無(wú)菌測(cè)試以及支原體檢測(cè)等。如果腺病毒載體編碼了一個(gè)熒光蛋白，我們還會(huì)進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)試以檢測(cè)熒光表達(dá)情況。此外，對(duì)于超純化腺病毒，我們會(huì)例行檢測(cè)內(nèi)毒素水平。如果您需要該結(jié)果呈現(xiàn)在相應(yīng)的COA文件上，我們將收取一定額外費(fèi)用。根據(jù)需求，我們也可以提供額外的QC服務(wù)。

如果您需要了解哪一種腺病毒最適合您的實(shí)驗(yàn)需求，請(qǐng)參照我們的常見(jiàn)問(wèn)題解答。

我們的Ad5/F35腺病毒制造過(guò)程如下（圖2）。攜帶目的基因（GOI）的Ad5/F35腺病毒轉(zhuǎn)移質(zhì)粒首先需要通過(guò)PacI限制性消化進(jìn)行線性化。該線性化的質(zhì)粒DNA被轉(zhuǎn)染到表達(dá)腺病毒基因E1的包裝細(xì)胞中以產(chǎn)生重組腺病毒。腺病毒顆粒被釋放到組織培養(yǎng)基中，然后進(jìn)行收集。對(duì)于超純化Ad5/F35腺病毒（體內(nèi)應(yīng)用級(jí)別），病毒顆粒通過(guò)氯化銫（CsCl）梯度超速離心進(jìn)一步純化和濃縮。我們使用基于免疫細(xì)胞化學(xué)的方法通過(guò)檢測(cè)腺病毒特異性六鄰體蛋白來(lái)測(cè)量病毒滴度。對(duì)于超純化Ad5/F35腺病毒，我們通過(guò)測(cè)量病毒顆粒的光密度（根據(jù)OD260數(shù)值）來(lái)估算滴度。

圖2 Ad5/F35腺病毒的典型生產(chǎn)流程

我們生產(chǎn)的Ad5/F35腺病毒的質(zhì)量控制包括滴度測(cè)定、針對(duì)細(xì)菌和真菌的無(wú)菌測(cè)試以及支原體檢測(cè)等。如果腺病毒載體編碼了一個(gè)熒光蛋白，我們還會(huì)進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)試以檢測(cè)熒光表達(dá)情況。此外，對(duì)于超純化腺病毒，我們會(huì)例行檢測(cè)內(nèi)毒素水平。如果您需要該結(jié)果呈現(xiàn)在相應(yīng)的COA文件上，我們將收取一定額外費(fèi)用。根據(jù)需求，我們也可以提供額外的QC服務(wù)。

Ad5腺病毒對(duì)比嵌合型Ad5/F35腺病毒

盡管人血清型5（Ad5）腺病毒是基于腺病毒的應(yīng)用中最常用的病毒類(lèi)型，與之相關(guān)的一個(gè)主要的限制是其感染靶細(xì)胞的能力依賴(lài)于柯薩奇病毒和腺病毒受體（Coxsackie-adenovirus receptor，CAR）。完全缺乏或CAR表達(dá)不足的宿主細(xì)胞將不能被Ad5腺病毒有效轉(zhuǎn)導(dǎo)。Ad5/F35腺病毒則通過(guò)整合了一種由腺病毒血清型35（Ad35）的頭部和莖部以及Ad5的尾部構(gòu)成的嵌合纖突蛋白幫助克服了這一限制。Ad5/F35腺病毒可以利用Ad35纖突蛋白結(jié)合非CAR類(lèi)型受體CD46的能力，使病毒顆粒附著靶細(xì)胞。由此Ad5/F35腺病毒可輕松轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR陰性細(xì)胞或CAR表達(dá)水平低的細(xì)胞，也可以轉(zhuǎn)導(dǎo)具有高水平的CAR表達(dá)的CAR陽(yáng)性細(xì)胞。Ad5/F35腺病毒的嵌合型設(shè)計(jì)在拓展腺病毒載體的宿主范圍方面發(fā)揮了重要作用，使其能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)那些用傳統(tǒng)Ad5腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低下的細(xì)胞系，如造血細(xì)胞、原始干細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和CAR陰性的腫瘤細(xì)胞。

如果您需要了解哪一種腺病毒最適合您的實(shí)驗(yàn)需求，請(qǐng)參照我們的常見(jiàn)問(wèn)題解答。

我們的gutless腺病毒制造過(guò)程如下（圖3）。一個(gè)由啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)目的基因（GOI）的表達(dá)盒首先被克隆至我們的gutless腺病毒載體的兩個(gè)ITR之間。該載體還插入了一段stuffer序列以保證兩個(gè)ITR之間的序列長(zhǎng)度大于28 kb，這是促進(jìn)高效的病毒包裝所必需的。經(jīng)過(guò)限制性消化，兩側(cè)是ITR的序列片段從質(zhì)粒上釋放。使用該片段轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞，后續(xù)再轉(zhuǎn)導(dǎo)輔助病毒以產(chǎn)生重組腺病毒顆粒。我們的gutless腺病毒包裝系統(tǒng)使用了一種包裝信號(hào)兩側(cè)為L(zhǎng)oxP位點(diǎn)的輔助病毒以及穩(wěn)定表達(dá)Cre重組酶的包裝細(xì)胞。該Cre重組酶介導(dǎo)了輔助病毒的包裝信號(hào)序列切除，從而防止輔助病毒基因組與gutless腺病毒基因組同時(shí)被包裝進(jìn)病毒顆粒。腺病毒顆粒最后被釋放到組織培養(yǎng)基中，然后進(jìn)行收集。

對(duì)于超純化gutless腺病毒（體內(nèi)應(yīng)用級(jí)別），病毒顆粒通過(guò)氯化銫（CsCl）梯度超速離心進(jìn)一步純化和濃縮。我們通過(guò)測(cè)量病毒顆粒的光密度（根據(jù)OD260數(shù)值）來(lái)估算滴度。

圖3 Gutless Ad5腺病毒的典型生產(chǎn)流程

對(duì)于我們生產(chǎn)的腺病毒，其質(zhì)量控制包括滴度測(cè)定、針對(duì)細(xì)菌和真菌的無(wú)菌測(cè)試以及支原體檢測(cè)等。如果腺病毒載體編碼了一個(gè)熒光蛋白，我們還會(huì)進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)試以檢測(cè)熒光表達(dá)情況。此外，對(duì)于超純化腺病毒，我們會(huì)例行檢測(cè)內(nèi)毒素水平。如果您需要該結(jié)果呈現(xiàn)在相應(yīng)的COA文件上，我們將收取一定額外費(fèi)用。根據(jù)需求，我們也可以提供額外的QC服務(wù)。

Gutless腺病毒對(duì)比Ad5和Ad5/F35腺病毒的優(yōu)勢(shì)

Gutless腺病毒載體（即輔助病毒依賴(lài)型腺病毒載體）是最新一代的腺病毒載體，且對(duì)比傳統(tǒng)腺病毒載體具有多種優(yōu)勢(shì)。Gutless腺病毒載體除了只保留對(duì)病毒復(fù)制和包裝必不可少的順式作用元件外，幾乎不含有任何病毒序列，這使其在體內(nèi)應(yīng)用時(shí)可以最小化免疫原性并延長(zhǎng)了轉(zhuǎn)基因表達(dá)時(shí)長(zhǎng)。因此，與Ad5或Ad5/F35腺病毒相比，Gutless腺病毒具有顯著改善的安全性特征，對(duì)于基因治療應(yīng)用是極具吸引力的候選工具。此外，缺乏病毒編碼序列使得該種載體的裝載量可達(dá)33 kb，非常適合表達(dá)長(zhǎng)的或多個(gè)轉(zhuǎn)基因。

如果您需要了解哪一種腺病毒最適合您的實(shí)驗(yàn)需求，請(qǐng)參照我們的常見(jiàn)問(wèn)題解答。

我們的gutless Ad5/F35腺病毒制造過(guò)程如下（圖4）。一個(gè)由啟動(dòng)子驅(qū)動(dòng)表達(dá)目的基因（GOI）的表達(dá)盒首先被克隆至我們的gutless腺病毒載體的兩個(gè)ITR之間。該載體還插入了一段stuffer序列以保證兩個(gè)ITR之間的序列長(zhǎng)度大于28 kb，這是促進(jìn)高效的病毒包裝所必需的。經(jīng)過(guò)限制性消化，兩側(cè)是ITR的序列片段從質(zhì)粒上釋放。使用該片段轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞，后續(xù)再轉(zhuǎn)導(dǎo)輔助病毒以產(chǎn)生重組腺病毒顆粒。我們的gutless腺病毒包裝系統(tǒng)使用了一種包裝信號(hào)兩側(cè)為L(zhǎng)oxP位點(diǎn)的輔助病毒以及穩(wěn)定表達(dá)Cre重組酶的包裝細(xì)胞。該Cre重組酶介導(dǎo)了輔助病毒的包裝信號(hào)序列切除，從而防止輔助病毒基因組與gutless腺病毒基因組同時(shí)被包裝進(jìn)病毒顆粒。腺病毒顆粒最后被釋放到組織培養(yǎng)基中，然后進(jìn)行收集。

對(duì)于超純化gutless腺病毒（體內(nèi)應(yīng)用級(jí)別），病毒顆粒通過(guò)氯化銫（CsCl）梯度超速離心進(jìn)一步純化和濃縮。我們通過(guò)測(cè)量病毒顆粒的光密度（根據(jù)OD260數(shù)值）來(lái)估算滴度。

圖4 Gutless Ad5/F35腺病毒的典型生產(chǎn)流程

對(duì)于我們生產(chǎn)的腺病毒，其質(zhì)量控制包括滴度測(cè)定、針對(duì)細(xì)菌和真菌的無(wú)菌測(cè)試以及支原體檢測(cè)等。如果Ad5F35腺病毒載體編碼了一個(gè)熒光蛋白，我們還會(huì)進(jìn)行轉(zhuǎn)導(dǎo)測(cè)試以檢測(cè)熒光表達(dá)情況。此外，對(duì)于超純化腺病毒，我們會(huì)例行檢測(cè)內(nèi)毒素水平。如果您需要該結(jié)果呈現(xiàn)在相應(yīng)的COA文件上，我們將收取一定額外費(fèi)用。根據(jù)需求，我們也可以提供額外的QC服務(wù)。

如果您需要了解哪一種腺病毒最適合您的實(shí)驗(yàn)需求，請(qǐng)參照我們的常見(jiàn)問(wèn)題解答。

Gutless Ad5/F35腺病毒對(duì)比gutless Ad5和傳統(tǒng)腺病毒的優(yōu)勢(shì)

我們的Ad5/F35 gutless腺病毒載體結(jié)合了gutless腺病毒和Ad/F35腺病毒的各自?xún)?yōu)點(diǎn)，具有更低的免疫原性、更長(zhǎng)時(shí)間的轉(zhuǎn)基因表達(dá)、更大的裝載容量以及更廣的宿主范圍。

Gutless腺病毒載體（即輔助病毒依賴(lài)型腺病毒載體）是最新一代的腺病毒載體，且對(duì)比傳統(tǒng)腺病毒具有多種優(yōu)勢(shì)。Gutless腺病毒載體除了只保留對(duì)病毒復(fù)制和包裝必不可少的順式作用元件外，幾乎不含有任何病毒序列，這使其在體內(nèi)應(yīng)用時(shí)可以最小化免疫原性并延長(zhǎng)了轉(zhuǎn)基因表達(dá)時(shí)長(zhǎng)。因此，與Ad5或Ad5/F35腺病毒相比，Gutless腺病毒具有顯著改善的安全性特征，對(duì)于基因治療應(yīng)用是極具吸引力的候選工具。此外，缺乏病毒編碼序列使得該種載體的裝載量可達(dá)33 kb，非常適合表達(dá)長(zhǎng)的或多個(gè)轉(zhuǎn)基因。

盡管人血清型5（Ad5）腺病毒是基于腺病毒的應(yīng)用中最常用的病毒類(lèi)型，與之相關(guān)的一個(gè)主要的限制是其感染靶細(xì)胞的能力依賴(lài)于柯薩奇病毒和腺病毒受體（Coxsackie-adenovirus receptor，CAR）。完全缺乏或CAR表達(dá)不足的宿主細(xì)胞將不能被Ad5腺病毒有效轉(zhuǎn)導(dǎo)。Ad5/F35腺病毒則通過(guò)整合了一種由腺病毒血清型35（Ad35）的頭部和莖部以及Ad5的尾部構(gòu)成的嵌合纖突蛋白幫助克服了這一限制。Ad5/F35腺病毒可以利用Ad35纖突蛋白結(jié)合非CAR類(lèi)型受體CD46的能力，使病毒顆粒附著靶細(xì)胞。由此Ad5/F35腺病毒可輕松轉(zhuǎn)導(dǎo)CAR陰性細(xì)胞或CAR表達(dá)水平低的細(xì)胞，也包括具有高水平的CAR表達(dá)的CAR陽(yáng)性細(xì)胞。Ad5/F35腺病毒的嵌合型設(shè)計(jì)在拓展腺病毒載體的宿主范圍方面發(fā)揮了重要作用，使其能夠轉(zhuǎn)導(dǎo)那些用傳統(tǒng)Ad5腺病毒轉(zhuǎn)導(dǎo)效率低下的細(xì)胞系，如造血細(xì)胞、原始干細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞和CAR陰性的腫瘤細(xì)胞。