IVT saRNA制備

自擴(kuò)增RNA（saRNA）具有RNA分子自我擴(kuò)增的能力，其表達(dá)量比傳統(tǒng)mRNA更高，表達(dá)時間也更長。這種能力是通過在RNA結(jié)構(gòu)中整合病毒序列（編碼復(fù)制酶和復(fù)制子元件）來實現(xiàn)的，并促使RNA以RNA依賴的方式自我復(fù)制。由于saRNA產(chǎn)生顯著免疫反應(yīng)所需的劑量遠(yuǎn)低于mRNA，該項技術(shù)正迅速被應(yīng)用于下一代RNA疫苗的研發(fā)，此外，saRNA還是蛋白替代療法中的一種非常有潛力的藥物候選。saRNA的序列優(yōu)化和生產(chǎn)過程與mRNA類似。云舟生物專門從事各種應(yīng)用的高質(zhì)量saRNA的設(shè)計和生產(chǎn)。

亮點

fast-TAT-from-cloning-to-LNP-encapsulation

從載體克隆到LNP封裝快至5周

獨有的序列優(yōu)化技術(shù)，提升表達(dá)水平

高度專業(yè)的團(tuán)隊為你的saRNA進(jìn)行設(shè)計與優(yōu)化，以取得最佳的表達(dá)量、產(chǎn)量和質(zhì)量

服務(wù)詳情

預(yù)制saRNA產(chǎn)品
治療性IVT RNA開發(fā)：IVT載體設(shè)計和克隆、IVT RNA生產(chǎn)和純化
LNP封裝：標(biāo)準(zhǔn)配方、定制配方、抗體偶聯(lián)LNP
CDMO服務(wù)：工藝開發(fā)、GMP生產(chǎn)、灌裝

技術(shù)詳情

saRNA復(fù)制機(jī)制

saRNA的自擴(kuò)增能力依賴于其第一個開放閱讀框編碼的復(fù)制酶。如圖1所示，從saRNA中翻譯出的非結(jié)構(gòu)蛋白（nsP）基因，其序列來源于甲病毒（Alphavirus），可形成多蛋白復(fù)制復(fù)合物（復(fù)制酶）負(fù)責(zé)RNA復(fù)制。其中，nsP1具有甲基轉(zhuǎn)移酶和鳥嘌呤轉(zhuǎn)移酶活性，扮演加帽酶的角色，而nsP2則是一種RNA解旋酶，并具有三磷酸酶活性。nsP3介導(dǎo)蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用。nsP4是一種RNA依賴的RNA聚合酶。復(fù)制酶復(fù)合物合成作為下游RNA復(fù)制模板的全長負(fù)鏈RNA。此外，保守序列元件（CSE）被放入轉(zhuǎn)基因的5' 和3' 非翻譯區(qū)（UTR），以實現(xiàn)復(fù)制酶介導(dǎo)的轉(zhuǎn)基因擴(kuò)增和轉(zhuǎn)錄。

由于復(fù)制酶基因的加入增大了的分子長度，saRNA在體外通常比傳統(tǒng)mRNA更難生產(chǎn)。特別是對于一條高效的saRNA生產(chǎn)線，確保產(chǎn)物的高一致性和高質(zhì)量是極具挑戰(zhàn)性的。云舟生物對saRNA生產(chǎn)線投入了大量研發(fā)資源，該生產(chǎn)線還可以根據(jù)您的項目需求進(jìn)行調(diào)整和定制。

圖1 saRNA的復(fù)制機(jī)制。

試驗驗證

IVTsaRNA expression in HEK293T cells.jpg

圖2 表達(dá)EGFP的saRNA與mRNA轉(zhuǎn)染HEK293T的效果對比。

IVT saRNA expression in mice.jpg

圖3 體內(nèi)試驗表明，saRNA相對mRNA表現(xiàn)出更長的表達(dá)時長。30 ug LNP封裝的FLuc mRNA與10 ug LNP封裝的FLuc saRNA對比表達(dá)效果，傳統(tǒng)mRNA在48 h后無法檢測到表達(dá)，而saRNA在肌肉注射后的表達(dá)可維持至少8天。

不同類型IVT RNA的比較

	mRNA	circRNA	saRNA
結(jié)構(gòu)	線性分子，通常包含5’ 帽子、5’ UTR、GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴	環(huán)狀分子，通常包含IRES元件和GOI的ORF	線性分子，通常包含5’ 帽子、5’ UTR、復(fù)制酶和GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴
帽子	需要5’ 帽子維持RNA穩(wěn)定性并招募核糖體	沒有帽子結(jié)構(gòu)，采用IRES元件招募核糖體	需要5’ 帽子維持RNA穩(wěn)定性并招募核糖體
RNA長度（nt）	100 ~ 10,000	1,000 ～ 5,000	7,000 ~ 10,000
穩(wěn)定性	相對低	高	相對低
是否可以在生產(chǎn)時引入修飾核苷？	是	通常不添加修飾	是
表達(dá)水平	相對低	中	高
表達(dá)時長	相對短	中	長
免疫原性	相對低	中	高