IVT環(huán)狀RNA（circRNA）制備

環(huán)狀RNA（circRNA）是一種共價封閉的單鏈RNA分子，它不包含帽子和聚腺苷酸（poly(A)）尾巴，且由于其降解動力學(xué)的改變，其轉(zhuǎn)基因表達(dá)時間相較于線性mRNA更為持久。這些優(yōu)勢促使體外轉(zhuǎn)錄（IVT）circRNA正在迅速被開發(fā)用于疫苗、治療遺傳性疾病和調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)等治療應(yīng)用。云舟生物專注于各種規(guī)模的定制circRNA生產(chǎn)。

亮點

高度專業(yè)的團(tuán)隊為你的circRNA進(jìn)行設(shè)計與優(yōu)化，以取得最佳的表達(dá)量、產(chǎn)量和質(zhì)量

針對編碼區(qū)和IRES獨有的序列優(yōu)化技術(shù)

全面的QC項目

服務(wù)詳情

預(yù)制circRNA產(chǎn)品
治療性IVT RNA開發(fā)：IVT載體設(shè)計和克隆、IVT RNA生產(chǎn)和純化
LNP封裝：標(biāo)準(zhǔn)配方、定制配方、抗體偶聯(lián)LNP
CDMO服務(wù)：工藝開發(fā)、GMP生產(chǎn)、灌裝

技術(shù)詳情

circRNA的環(huán)化和翻譯

云舟生物基于Ⅰ型內(nèi)含子的PIE（Permuted Intron-Exon）系統(tǒng)，開發(fā)了可用于制備高產(chǎn)量、高純度的環(huán)狀RNA（circRNA）生產(chǎn)平臺（圖1）。通過這種機(jī)制生成的circRNA具有極少的雜質(zhì)并最小化疤痕序列的存在。circRNA的翻譯依賴于內(nèi)部核糖體進(jìn)入位點（IRES）。IRES招募核糖體在轉(zhuǎn)錄本的內(nèi)部獨立于其5’ 端啟動翻譯。

Mechanism_of_circRNA_self-splicing_and_generation_in_vitro.jpg

圖1 體外circRNA自剪切機(jī)制。circRNA的翻譯是IRES依賴的。

試驗驗證

EGFP IVT circRNA expression in HEK293T cells.jpg

圖2 EGFP IVT circRNA在HEK293T細(xì)胞中的表達(dá)效果。circRNA轉(zhuǎn)染HEK293T細(xì)胞，對比mRNA具有更持久的表達(dá)效果。

不同類型IVT RNA的比較

	mRNA	circRNA	saRNA
結(jié)構(gòu)	線性分子，通常包含5’ 帽子、5’ UTR、GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴	環(huán)狀分子，通常包含IRES元件和GOI的ORF	線性分子，通常包含5’ 帽子、5’ UTR、復(fù)制酶和GOI的ORF、3’ UTR、以及poly(A)尾巴
帽子	需要5’ 帽子維持RNA穩(wěn)定性并招募核糖體	沒有帽子結(jié)構(gòu)，采用IRES元件招募核糖體	需要5’ 帽子維持RNA穩(wěn)定性并招募核糖體
RNA長度（nt）	100 ~ 10,000	1,000 ～ 5,000	7,000 ~ 10,000
穩(wěn)定性	相對低	高	相對低
是否可以在生產(chǎn)時引入修飾核苷？	是	通常不添加修飾	是
表達(dá)水平	相對低	中	高
表達(dá)時長	相對短	中	長
免疫原性	相對低	中	高